为什么神经球吹打传代后，状态很差

jessewill

原代培养的神经球吹打50次之后，在显微镜下看球基本上被吹打成单细胞，48H之后产生一些细胞球，但是感觉球的状态非常差" K8 D, q) R  n9 y. A
' d/ `9 ^; a' i8 |7 ^/ O5 _! a
1.球周围不圆润
  O2 c9 t0 U" R& r8 o. C  P: @2.球的立体感不强，像很多细胞粘在一起，没有神经球的立体感5 O0 s8 A2 o. j: o: {4 W% L
" e" |1 Z/ U" t4 Q! G4 _7 ]3 Q
为什么会这样？我才传第二代啊，求解释

细胞海洋

建议上图

zpzp0312

聚集生长的细胞都会有这样的问题+ @0 d; Q1 L' `0 n  S8 _
建议用机械法传代7 g4 P% U: Z1 v& h( _5 s% A- ~
或者使用胶原酶多作用一段时间
! s& a  {; @0 W7 n$ }. s胶原酶比较温和

jojomayer

回复 zpzp0312 的帖子4 R0 h, }6 X9 }" w% c4 k

/ _4 |- B% E8 y5 f& G: q请问您说的胶原酶是Accutase？

zpzp0312

回复 jojomayer 的帖子5 X  x/ E2 J: H$ w3 M* z( N  r" N
  X# _6 ]4 j8 q7 ]1 y
是传统的胶原酶
7 N- i2 q7 p1 i6 iaccutase也是可以的，但作用似乎差一些，如果可以在消化后使用机械力choping也是可以的。
2 i7 i1 S3 \7 T7 V+ m通常来说accutase主要是作用于活力差的细胞类型。如果是单层生长的细胞效果比较明显" Z. A; u8 M1 [. |* ~: j
你可以先用传统的胶原酶

ss安雅熙

我 的神经球 机械吹打根本不能成单细胞 我的原代培养密度10的6次方，4~5天就能传代 球很多 制备单细胞比较困难  但是消化成晓得团块即可 这样长起来的时间就会比较快 单细胞可能长的慢些

招财鼠

回复 ss安雅熙 的帖子- t% O9 S- z8 l# v; Q
! J* P! G4 X" Z
神经球打散传代以后可以成功进行贴壁培养吗。。。。？？？

xiangxiaoliang

神经球用Accutase 37度消化5min后，800rpm，3min 离心去掉accutase；再用加200ul完全培养基，用200ul枪头吹打20次；最后加800ul培养基，计数。一般48h后形成的球是跟你描述的差不多，五天左右球的形态就很正常了。