为什么神经球吹打传代后，状态很差

jessewill

原代培养的神经球吹打50次之后，在显微镜下看球基本上被吹打成单细胞，48H之后产生一些细胞球，但是感觉球的状态非常差- M7 R( c! q$ [
) `. g8 m4 x$ T: s3 N
1.球周围不圆润; n7 W+ N& B" p# Q
2.球的立体感不强，像很多细胞粘在一起，没有神经球的立体感$ p1 x: N6 A' g8 @0 W5 s' r

) M- o% o* y4 e, y& Y+ ]3 t为什么会这样？我才传第二代啊，求解释

细胞海洋

建议上图

zpzp0312

聚集生长的细胞都会有这样的问题# b0 e/ F8 R6 S0 P& A$ ^1 y1 B$ O
建议用机械法传代/ [, |+ c8 |" `% N8 s8 f5 j
或者使用胶原酶多作用一段时间
$ n) @. b# @; Z% J$ _胶原酶比较温和

jojomayer

回复 zpzp0312 的帖子; t+ J$ f# U# {1 ~0 }' I. o5 S

4 I  e3 K( A0 p/ X7 g" |+ s/ v请问您说的胶原酶是Accutase？

zpzp0312

回复 jojomayer 的帖子, _9 y7 V1 v! l) X

& E! s4 l  p+ q* c2 U% j是传统的胶原酶2 ~  K+ C' |6 X* q& O0 G
accutase也是可以的，但作用似乎差一些，如果可以在消化后使用机械力choping也是可以的。2 c, \% g% e! D5 J; I0 d# Z- T
通常来说accutase主要是作用于活力差的细胞类型。如果是单层生长的细胞效果比较明显
" o& Q$ v) L' {3 n你可以先用传统的胶原酶

ss安雅熙

我 的神经球 机械吹打根本不能成单细胞 我的原代培养密度10的6次方，4~5天就能传代 球很多 制备单细胞比较困难  但是消化成晓得团块即可 这样长起来的时间就会比较快 单细胞可能长的慢些

招财鼠

回复 ss安雅熙 的帖子" P0 l- e' Y7 o) z' E6 C0 ^; ]
9 A9 H; B# {, H5 N) k
神经球打散传代以后可以成功进行贴壁培养吗。。。。？？？

xiangxiaoliang

神经球用Accutase 37度消化5min后，800rpm，3min 离心去掉accutase；再用加200ul完全培养基，用200ul枪头吹打20次；最后加800ul培养基，计数。一般48h后形成的球是跟你描述的差不多，五天左右球的形态就很正常了。