关于DC-CIK共培养

yanlu98

给位前辈，我想向大家请教一下一般DC在培养后第几天和CIK共培养，共培养时怎么收集DC，我看到以前的帖子，有前辈说用冷盐水冲，为什么要用冷盐水呢，那是多少度的盐水？而且用盐水冲过了之后要离心再把细胞收集起来移到CIK里面吗？希望各位前辈不吝赐教，越详细越好啊！

大少爷

DC细胞培养第六天/第七天，在显微镜下观察细胞，细胞变为毛刺状悬浮细胞，终止培养。
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DC细胞收集：将贴壁细胞培养瓶中的培养液混匀后，转移至50 ml（或250 ml）无菌离心管，
+ w/ i$ c6 B/ ^立即向培养瓶加入10ml 4℃预冷的生理盐水，迅速晃动和吹打，立即移至离心管，重复上述步骤，* i! ?1 F1 i. @6 Y
直至在倒置显微镜下观察，绝大多数为贴壁紧密的细长梭形细胞为止。
- m, o) _: Y% {/ G+ l将收集好的DC悬液离心（300g，12min，RT）弃上清，用移液管加生理盐水将细胞液稀释，. G0 u3 P1 U- I
混匀，离心，上清去掉，用培养基重悬细胞，加入悬浮培养细胞中与悬浮细胞共同培养。' _# G" [% b/ P3 R$ P! W9 ]! H

( @# `6 b. J0 u, l5 H冷盐水刺激DC细胞收缩，便于从培养瓶上脱落，也容易吹打下来。不能用细胞刮刀或细胞消化液，对细胞损伤太大。

yanlu98

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非常感谢大少爷！！

yanlu98

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( X( m$ Y( c+ E. k) }还想问一下大少爷 你说的“直至在倒置显微镜下观察，绝大多数为贴壁紧密的细长梭形细胞为止”，那剩下的梭型细胞是什么呢？还想麻烦你能不能发几张你养的DC给我学习学习呢？

yanlu98

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$ c0 ?/ O8 @! F% m, D7 s. R- H5 ~0 s+ I4 E% }
还想请教一下大少爷，用冰生理盐水冲就是为了让细胞收缩，那我直接用4度的1640冲，冲完了直接加进CIK里，就不离心了，可以吗？

大少爷

我没试过,不知道效果怎么样,你可以试,然后告诉我效果,% [; D' d9 N, Y2 _0 M5 z3 d
你真聪明

大少爷

我没试过,不知道效果怎么样,你可以试,然后告诉我效果,) o: e7 A5 }& }) b; t" B
你真聪明