关于DC-CIK共培养

yanlu98

给位前辈，我想向大家请教一下一般DC在培养后第几天和CIK共培养，共培养时怎么收集DC，我看到以前的帖子，有前辈说用冷盐水冲，为什么要用冷盐水呢，那是多少度的盐水？而且用盐水冲过了之后要离心再把细胞收集起来移到CIK里面吗？希望各位前辈不吝赐教，越详细越好啊！

大少爷

DC细胞培养第六天/第七天，在显微镜下观察细胞，细胞变为毛刺状悬浮细胞，终止培养。
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+ V5 e1 I6 _7 I  K4 b% {& lDC细胞收集：将贴壁细胞培养瓶中的培养液混匀后，转移至50 ml（或250 ml）无菌离心管，
- D4 |) k: f* |; `0 w" e立即向培养瓶加入10ml 4℃预冷的生理盐水，迅速晃动和吹打，立即移至离心管，重复上述步骤，
$ L" m" z' n2 r0 F0 {6 ?/ ^直至在倒置显微镜下观察，绝大多数为贴壁紧密的细长梭形细胞为止。
% \& j2 a7 A3 O7 W将收集好的DC悬液离心（300g，12min，RT）弃上清，用移液管加生理盐水将细胞液稀释，! t1 k2 |/ D( z; C6 g8 l% M
混匀，离心，上清去掉，用培养基重悬细胞，加入悬浮培养细胞中与悬浮细胞共同培养。/ I: x* V3 v' z6 a6 e

6 _- E, l! R% V6 ~% Q1 G. J5 _9 e冷盐水刺激DC细胞收缩，便于从培养瓶上脱落，也容易吹打下来。不能用细胞刮刀或细胞消化液，对细胞损伤太大。

yanlu98

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非常感谢大少爷！！

yanlu98

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% t& @, x# z& H# e还想问一下大少爷 你说的“直至在倒置显微镜下观察，绝大多数为贴壁紧密的细长梭形细胞为止”，那剩下的梭型细胞是什么呢？还想麻烦你能不能发几张你养的DC给我学习学习呢？

yanlu98

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* _5 k* \3 I6 b# i8 ~- G" [% k! U3 x# m) L
还想请教一下大少爷，用冰生理盐水冲就是为了让细胞收缩，那我直接用4度的1640冲，冲完了直接加进CIK里，就不离心了，可以吗？

大少爷

我没试过,不知道效果怎么样,你可以试,然后告诉我效果,/ B0 V6 [1 o" N6 `4 T2 K) i
你真聪明

大少爷

我没试过,不知道效果怎么样,你可以试,然后告诉我效果,
# E( P6 E' S! S/ G* p, R2 l你真聪明