原代培养的间充质干细胞一般多久会老化？

hanchao

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& c3 l) R$ Q5 Q& x, \请问您使用什么胰酶？大概消化时间是多少，我大概1min，晃晃瓶子细胞就开始飘了。。。正常吗？

huajie881026

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4 G- o: d$ T8 \; X0 g0 N/ X* y8 Q" W% i( b* a
Gibco的0.25%trypsin+EDTA，每次大概消化1-2min，不超过3min，脐带的原代难消化一点。你晃晃瓶子就漂起来了不蛮好，胰酶给力啊，就可以马上终止消化了。我有时候消化3min不止，有的漂起来，有的还贴壁，有的甚至还没变形，这样对细胞就不好，消化时间会比较长一点。

yunshi503

MSCs老化与体外操作关系巨大，也就是说MSCs脱离了其寄居的干细胞池后，显得异常脆弱，不合适的动作（传代过程中）、不适宜的pH、不适宜的营养都可能引起衰老，另外细胞千万不要长密了，一般不要过80%的融合度，这是最重要的一点

michellejo

如果是原代长得还好，但是传代后就老化了，可以试一下降低原代消化胰酶的浓度，接种密度适当提高一点，我们之前也遇到过类似情况，这样处理后有改善。

pear7127

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  G+ V4 ]& ], s5 q3 M' T0 p" e; ?$ f. q* M2 f3 o% u) [
弱弱地问一下，为什么培养基要避光啊？

lovesxj941

细胞变圆不贴壁 一般是污染或者培养基问题   排除污染以后 看培养基缺乏什么   一般来说 谷氨酰胺 半衰期较短  容易缺乏。

deshenglll

无血清培养基主要是因子的有效期。一般为1个月。有些老化不太严重的细胞还是能养回来的。不过要传代培养2代以上才好看到效果。主要是接种密度的问题。

deelon

回复 huajie881026 的帖子# S4 T* v2 v8 ?$ r. i' p3 x
: n8 {3 l4 Z% z; v1 s; c7 n. j
试试看用PBS洗的时候静置2min左右，缩短胰酶消化时间，消化效果挺好的。

gaojingyu0311

回复 ruofan1982 的帖子0 S/ p4 y0 @1 V- S
9 K8 }" O3 S& c& _; u
我们现在用的就是Triple，但我是新手，第一次操作时比较轻柔，但还有很多细胞没消化下来，第二次消化时我特意反复吹打，结果收获的细胞活率较低。。

MCARS

回复 ruofan1982 的帖子/ O8 z3 Z0 \: \3 F
1 Q6 [0 K" s0 P. p
你好，用tryple消化怎么终止，我们目前是用大量生理盐水稀释，没办法完全终止，因为用的是无血清培养基，不确定能不能像血清那样终止胰酶的消化