原代培养的间充质干细胞一般多久会老化？

lwr002

细胞前一天还长得好好的，想等它长多点再传代的，结果今天大早上来看到细胞都变圆了，是时间太久，细胞老化了吗？今天是第21天！还有无血清培养基一般4度能保存多久？我用了三个星期了，是不是跟培养基用太久有关呢?请求前辈们解答，谢谢！

huajie881026

细胞变圆？飘起来了？/ v" [9 p; ?3 m1 n$ Q
老化的细胞你可以看到胞质内很多黑色颗粒和空泡，形态方面立体感消失，不再呈现饱满的梭型，变得多角形。。。

细胞海洋

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建议上图

bsx1111

无血清培养基一般4度能保存一个月

xingyuncao

lz，我也遇到跟你一模一样的问题，郁闷啊

jennyshizz

请问你首次换液时间是？我们一般在培养36小时之后第一次换液，之后3天左右换一次液，培养基的话之前是不是有用过，有没有可能过期或者重要营养物质已经失效

hanchao

回复 huajie881026 的帖子! `; \, v: M. u
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好贴切啊。。。就是这个样子的。你说老化的细胞还有没有可能再恢复干性啊？我们养的原代好好的，每次第一次传代后，细胞都会发生形态变化，变的多角形。为什么会这样呢？考虑过胰酶的问题，但是自己配过和买的现成的胰酶结果都是一样的。0.25%胰酶+0.01%EDTA，还可能是什么原因吗啊？我们还试过细胞培养瓶和培养皿。但是效果都是一样的。谁给解答解答~~~哭了~

huajie881026

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老化的细胞恢复干性？不可能吧，就像你能返老还童吗？
; b5 W5 h; N8 g- x, y8 P老化最主要的原因可能就是胰酶消化的关系，即使不消化过度，胰酶对细胞也有损伤。
1 _4 x! H% S3 `4 d* ]我自从找到老化的原因后就尽量缩短消化时间，争分夺秒。但这样随之而来的问题就是很多细胞没有消化下来。

hootheart

要看原代细胞的状态，如果细胞状态好，传代的时候细胞形态不会有很大的变化，细胞是会越传越老的，细胞状态好的可以传7-8代，状态一般的可以传4代左右，状态差的话传能3代就不错了，我说的是再保证细胞质量的前提下；老化的细胞不会回复干性了，也就是说，扁平状细胞不会恢复成有立体感的细胞，只会越传越老。

ruofan1982

试试用Tryple消化，这个消很温和。以前我们也是用的Trypsin，现在改用Tryple，效果还不错。