第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

jun8013

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, L2 s" ~' ?* i9 T5 }, l; C$ G" [" ~" q2 c
谢啦O(∩_∩)O~发现MEF长得好快啊，，，，，我几乎一天就的传。。。。

南宫燚岚

分离原代MEF最好用体视镜，这样可以保证较好的纯度。. g4 J4 |; d5 U4 \# k* J
另外，分离完三四个胚胎之后就开始进行后续的消化等操作，不要等到十来个胚胎全部分完后在统一操作，胚胎活性不好分出来的MEF也会受影响，所以两个人流水线作业会比较好。关于铺板，我会2个胚胎铺一个T75，这样就不用第二天就满的不行要传代了……
$ \. H2 f& p6 Y- M' V' R7 o贴壁后一天，我会用PBS洗一遍，大的组织块自然掉下来了，剩下的用真空吸管吸走，MEF增值能力强，会长起来的。而且传代的过程中组织块也会慢慢消失的。. i! i  S7 m3 A
培养液的成分也挺重要的，不知道你怎么配的。

jun8013

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0 C. G) w  O( v- T' y, I' E
) ^4 \! ~  y, y+ \: o# D# P我三个胚胎一个T75发现第二天就满了，就消化了，组织块用PBS洗了5次，感觉少了，不过后面消化传代发现是几乎没有了，所以慢慢消化看样是可以的，不用过目筛。5 R* m4 M, p1 m, U
我培养基90%DMEM+10%FBS+2mM L-glutamine+P/S
4 S. J+ `6 Z' l9 b- ~* I* P全部过滤除菌，P/S Glutamine买成品，没过滤直接加

huangcong1988

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# T0 |% {, [9 G$ ]- T# f; Y- {剪躯干干嘛呢？去头脚，内脏就行了，如果鼠小的话，还可以不去四肢，去头跟内脏就行。躯干剪碎的话，剪得越碎越好，剩下的东西再少的话，应该也能一到两个胚胎一个T75瓶，多了太浪费了，原代就冻，每代都冻，传一代冻一半。

fwj81

我做的MEF第一代也很杂，现在是第2代，感觉好多了。胚胎成纤维细胞出来了。上图：

jun8013

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5 n" v; m3 s, Y% Y
原代没冻现在打算没代就动，长得太快了这MEF

huangcong1988

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5 F9 Q9 K( l& D& G0 k0 w
7 g: h" Y0 ]# b1 Q$ d" ]5 j10倍镜下看的么？还是有点杂，感觉。

huangcong1988

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8 J0 g( s9 j" x( k
  N& f1 E# H* ^) v  e! Z这是我上次分的

南宫燚岚

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" L; x4 t5 V6 Q9 T' b2 F0 \, `8 g7 U+ `( s# U: Y3 C7 q, ^
FBS最好灭活一下

jun8013

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3 C# g4 m8 e* y' g1 o& K. a, R) V2 \) C
太好了，收藏下。请问前辈，您胰酶消化时用多少浓度的0.05%还是0.25% 。还有消化时有一些没消化下来的，感觉还不少，4倍镜下看，这些细胞还要吗？是不是老点的细胞难消化啊
' w( o. {/ p" D: N! e! R2 o7 j! J
$ R4 \) ]* O/ Y5 o1 ~0.05%消化多久，我感觉我消化了快5min钟