关于包装慢病毒过程中的几个问题

我爱火热的冬天

我现在在包慢病毒，一直处于摸索阶段，有以下几个问题忘各位朋友帮忙解答
( B* u/ y* e, V$ S1、用于包装的质粒抽提用哪个公司的比较好，平常的用于无内毒素的大提试剂盒可以吗？. t3 N" I6 R6 {
2、看到很多帖子对于慢病毒的滴度很是在意，滴度一般在多少范围内可以接受呢？
6 c; v* ^6 Z8 d$ A4 n$ v4 `3、我也是用的KOSM四个因子诱导ips的，想问是四个分开诱导好呢，还是连接到一个载体上诱导好呢？7 {4 D0 D2 E) ^
4、在包病毒的过程中是不加双抗的，好像是说对病毒的包装有影响，可是双抗不是只对细菌有作用吗？具体是什么影响呢？0 U4 o! S! c* ?: A+ R/ M
谢谢~

tjbiohf

1我们lab用的是invitrogen的中提试剂盒
9 }7 S2 A+ A$ `. w# y7 t2如果要做显微注射的话对病毒滴度的要求比较高要10的8次方以上，一般感染细胞的话用不了这么高的。
6 W  J1 S, c# h4 j2 \1 a4这个我也不清楚的，我们老板要求我们平时养细胞也不加双抗，只在做原代时加双抗。

我爱火热的冬天

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' D4 V( u7 E, Z+ t8 C' b) c  |
8 s" p; h7 h7 u2 L. a! v% V- i谢谢

184lj

质粒的提取要注意看一下 质粒长度，如果过长，不要用吸附法的试剂盒，要用沉淀法的试剂盒。还有去内毒素是必须的。

我爱火热的冬天

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9 |. U  ^, M7 `$ |8 A( }2 J% [. ~  {2 l6 N
我的片段是属于过长的那种，如果不用吸附柱的话，还有哪些沉淀法的试剂盒效果不较好，希望推荐一下你们用的。:)

184lj

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: {% u! Y1 k, x( I威格拉斯（北京）

SSRSQ

1：以前一直用天根的，但是天根的大提试剂盒有时候会提不出来，现在用欣研的盒子，不过是你那可能没有这个公司代理。平时用的无内毒素的盒子就可以的，注意浓度别太低，500ng/ul以上吧。
0 O; }/ i* O8 \: @4 [" {7 n$ V1 h2：我们实验室不测滴度，形成了自己的习惯，我们是一个10cm板收的病毒可以感染一个六孔板。# _6 M) N* j6 f. A9 a
3：不建议放在一个载体上。理论上放在一个载体上是可以的，但是那样你的病毒质粒会很大，看你的包装系统最多可以加多长的外源基因了，如果你用2A连接OSKM的话后面的因子表达会有影响。所以最好分开各自有各自质粒，分开包病毒。
: p% d! `( @2 D" y% ~! @4：双抗这个对细胞状态肯定是有影响的，我们实验室一般都不用双抗。我个人感觉抗生素在溶液中怎么的也会对细胞有影响，至于机制不清楚了。

我爱火热的冬天

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& D: @! j$ i4 }& p
感谢回复，回答的很详细，很受用，谢谢

sue

1. Qiagend的Midi-Prep Kit, 直接用；8 G9 d5 U( O  T
3. 不同的质粒，分开包装；) j, V$ Y2 @2 N: ^
4. 跟所用的试剂有关。我们用的XtremeGene，包装时加双抗，而且不换液，48-72小时直接收病毒