关于包装慢病毒过程中的几个问题

我爱火热的冬天

我现在在包慢病毒，一直处于摸索阶段，有以下几个问题忘各位朋友帮忙解答- \3 m, H2 o) y2 p9 E/ |5 H
1、用于包装的质粒抽提用哪个公司的比较好，平常的用于无内毒素的大提试剂盒可以吗？
" V! x8 Y( o$ ]$ Z6 u2、看到很多帖子对于慢病毒的滴度很是在意，滴度一般在多少范围内可以接受呢？
  b' {8 x! `1 s9 A$ _0 M3、我也是用的KOSM四个因子诱导ips的，想问是四个分开诱导好呢，还是连接到一个载体上诱导好呢？3 S3 p8 j$ f: `! E$ F8 I
4、在包病毒的过程中是不加双抗的，好像是说对病毒的包装有影响，可是双抗不是只对细菌有作用吗？具体是什么影响呢？
: I$ w; r" E5 T% q4 {! Q. Y谢谢~

tjbiohf

1我们lab用的是invitrogen的中提试剂盒
0 l6 D) X. W+ y  ?: e2 n9 @2如果要做显微注射的话对病毒滴度的要求比较高要10的8次方以上，一般感染细胞的话用不了这么高的。
) |" M9 U) t, s, s: v7 C4这个我也不清楚的，我们老板要求我们平时养细胞也不加双抗，只在做原代时加双抗。

我爱火热的冬天

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1 b1 n# u1 b) @: Z% d* h& M谢谢

184lj

质粒的提取要注意看一下 质粒长度，如果过长，不要用吸附法的试剂盒，要用沉淀法的试剂盒。还有去内毒素是必须的。

我爱火热的冬天

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$ _! b! R- X/ O% e" \: M3 a5 ^5 R1 \# y5 y
我的片段是属于过长的那种，如果不用吸附柱的话，还有哪些沉淀法的试剂盒效果不较好，希望推荐一下你们用的。:)

184lj

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- J1 e9 L* [' ]+ L+ g: y4 z8 q2 m2 r* p: s& ~
威格拉斯（北京）

SSRSQ

1：以前一直用天根的，但是天根的大提试剂盒有时候会提不出来，现在用欣研的盒子，不过是你那可能没有这个公司代理。平时用的无内毒素的盒子就可以的，注意浓度别太低，500ng/ul以上吧。
# l) U9 S, x0 R* ~, U2：我们实验室不测滴度，形成了自己的习惯，我们是一个10cm板收的病毒可以感染一个六孔板。1 X3 I7 k9 o% P3 b: R: g
3：不建议放在一个载体上。理论上放在一个载体上是可以的，但是那样你的病毒质粒会很大，看你的包装系统最多可以加多长的外源基因了，如果你用2A连接OSKM的话后面的因子表达会有影响。所以最好分开各自有各自质粒，分开包病毒。2 P' C) w) U: b! n) h8 ?4 M
4：双抗这个对细胞状态肯定是有影响的，我们实验室一般都不用双抗。我个人感觉抗生素在溶液中怎么的也会对细胞有影响，至于机制不清楚了。

我爱火热的冬天

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' g  ]1 b) Y* d6 J  v0 ~感谢回复，回答的很详细，很受用，谢谢

sue

1. Qiagend的Midi-Prep Kit, 直接用；
" I6 q& n( f# F2 ?/ O# c% u3. 不同的质粒，分开包装；
, d  n9 |, P  Y4. 跟所用的试剂有关。我们用的XtremeGene，包装时加双抗，而且不换液，48-72小时直接收病毒