关于包装慢病毒过程中的几个问题

我爱火热的冬天

我现在在包慢病毒，一直处于摸索阶段，有以下几个问题忘各位朋友帮忙解答
( W; A( }) j4 p0 H% y1、用于包装的质粒抽提用哪个公司的比较好，平常的用于无内毒素的大提试剂盒可以吗？" w  v1 u# u) X7 H
2、看到很多帖子对于慢病毒的滴度很是在意，滴度一般在多少范围内可以接受呢？( \1 W0 N% X. G! {
3、我也是用的KOSM四个因子诱导ips的，想问是四个分开诱导好呢，还是连接到一个载体上诱导好呢？
7 Z3 G% G) ^: r! K1 _* h# O" ^4、在包病毒的过程中是不加双抗的，好像是说对病毒的包装有影响，可是双抗不是只对细菌有作用吗？具体是什么影响呢？
& f# t7 ^) L6 p3 W, J谢谢~

tjbiohf

1我们lab用的是invitrogen的中提试剂盒& v' U1 D4 ^! @4 @8 w0 J
2如果要做显微注射的话对病毒滴度的要求比较高要10的8次方以上，一般感染细胞的话用不了这么高的。3 |3 s6 u! u( Y- ~
4这个我也不清楚的，我们老板要求我们平时养细胞也不加双抗，只在做原代时加双抗。

我爱火热的冬天

回复 tjbiohf 的帖子; q/ U+ v3 M( u: B+ |5 w0 {8 d
3 g+ c0 I7 R3 G: Z
谢谢

184lj

质粒的提取要注意看一下 质粒长度，如果过长，不要用吸附法的试剂盒，要用沉淀法的试剂盒。还有去内毒素是必须的。

我爱火热的冬天

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9 Y; C& I2 @0 G7 {
我的片段是属于过长的那种，如果不用吸附柱的话，还有哪些沉淀法的试剂盒效果不较好，希望推荐一下你们用的。:)

184lj

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5 E7 @' ^* d$ H' T
威格拉斯（北京）

SSRSQ

1：以前一直用天根的，但是天根的大提试剂盒有时候会提不出来，现在用欣研的盒子，不过是你那可能没有这个公司代理。平时用的无内毒素的盒子就可以的，注意浓度别太低，500ng/ul以上吧。
( Y5 i9 q) N! G9 }; B- H7 s4 F* ^2：我们实验室不测滴度，形成了自己的习惯，我们是一个10cm板收的病毒可以感染一个六孔板。
, \& q* T- ~. b0 L( s3：不建议放在一个载体上。理论上放在一个载体上是可以的，但是那样你的病毒质粒会很大，看你的包装系统最多可以加多长的外源基因了，如果你用2A连接OSKM的话后面的因子表达会有影响。所以最好分开各自有各自质粒，分开包病毒。' W" S1 V2 g, J* ?8 r; Q
4：双抗这个对细胞状态肯定是有影响的，我们实验室一般都不用双抗。我个人感觉抗生素在溶液中怎么的也会对细胞有影响，至于机制不清楚了。

我爱火热的冬天

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0 o' C& _  ~. B" K. e8 U& n
感谢回复，回答的很详细，很受用，谢谢

sue

1. Qiagend的Midi-Prep Kit, 直接用；7 ?" L3 ?. D4 }+ w+ D: |1 k
3. 不同的质粒，分开包装；
7 c' \/ d2 _  a4. 跟所用的试剂有关。我们用的XtremeGene，包装时加双抗，而且不换液，48-72小时直接收病毒