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[请教] 关于抗体的问题; [复制链接]

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楼主
发表于 2011-3-19 11:27 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 痞子的烟头 于 2011-3-19 11:29 编辑
1 n6 X) K) ?4 x- P
) B- j7 Z6 H" ~向大家请教个问题,因为我对制备抗体接触很少,有很多不确定的因素:  + }- p, K2 Q6 t' W$ `+ R
兔抗FITC多克隆抗体,我是采用FITC偶联KLH免疫兔子的,但是现在到后期检测,如果我用血清兔抗FITC多克隆抗体是否能通过WB来检测GFP蛋白?  另外,关于效价的问题? 具体的ELISA 试剂盒该用哪一种?,是否可以不用免疫一个月时间就进行抽血检测??
* ?7 H+ X* O& c' x, p7 D" w谢谢! " ^* H3 {6 E) h' j" d. z$ @+ W
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沙发
发表于 2011-3-19 16:29 |只看该作者
首先你制备的是多克隆抗体,多克隆抗体的免疫原性强,但特异性弱。制备多克隆抗体需要一个月的时间,一个月产生的是IgG抗体,一周产生的是IgM 抗体,另外关于抗体的效价要应用棋牌法来确定,就是在板上包被系列稀释的抗原,然后抗血清也系列稀释,最后找到OD值等于1的为最佳稀释比例,做WB也应该做抗血清稀释试验,确定最佳比例,这样就可以检测抗原的表达了。另外你的抗体偶联了FITC,不知道是不是就不用OD值来确认了,是不是就看荧光表达最强,就是最佳稀释比例。  _) v# {3 |, {5 y* Q1 V# r/ R
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藤椅
发表于 2011-3-25 23:26 |只看该作者
这个不需要试剂盒了,可以每周抽血检测一次
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