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痞子的烟头

版主

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楼主

发表于 2011-3-19 11:27 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本帖最后由痞子的烟头于 2011-3-19 11:29 编辑 # ?- T8 V) _+ m  Z; F

向大家请教个问题，因为我对制备抗体接触很少，有很多不确定的因素：
兔抗FITC多克隆抗体，我是采用FITC偶联KLH免疫兔子的，但是现在到后期检测，如果我用血清兔抗FITC多克隆抗体是否能通过WB来检测GFP蛋白？  另外，关于效价的问题？具体的ELISA 试剂盒该用哪一种？，是否可以不用免疫一个月时间就进行抽血检测？？
谢谢！
急

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沙发

发表于 2011-3-19 16:29 |只看该作者

首先你制备的是多克隆抗体，多克隆抗体的免疫原性强，但特异性弱。制备多克隆抗体需要一个月的时间，一个月产生的是IgG抗体，一周产生的是IgM 抗体，另外关于抗体的效价要应用棋牌法来确定，就是在板上包被系列稀释的抗原，然后抗血清也系列稀释，最后找到OD值等于1的为最佳稀释比例，做WB也应该做抗血清稀释试验，确定最佳比例，这样就可以检测抗原的表达了。另外你的抗体偶联了FITC，不知道是不是就不用OD值来确认了，是不是就看荧光表达最强，就是最佳稀释比例。