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【付小兵：表皮细胞去分化】
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4 x2 W1 O% s" K孙晓艳博士学位论文（导师 付小兵）：“表皮细胞去分化形成表皮干细胞的基础研究” http://www.lw23.com/lunwen_617461182/+ s2 ~$ P5 Q; ]5 X
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目的:从建立表皮细胞去分化模型入手,比较去分化来源的表皮干细胞和机体自身来源的表皮干细胞在功能和生物学特性等方面的异同点,为实现无延迟、无瘢痕完美修复及皮肤组织的再生提供新的实验参考。2 n q, y( W {0 t
) v7 f& G) @$ r- c v" A' n方法：采用免疫组织化学的方法探寻胎儿皮肤中的表皮干细胞(epidermal stemcells,ESCs),研究不同发育时期ESCs在胎儿皮肤中分布与迁移。采用改良的Ⅳ型胶原铺板选择黏附法分离培养人ESCs,观察其形态及增值分化的特点,并进行细胞免疫组织化学鉴定。同时,提取小鼠胚胎发育中期组织液,模拟表皮干细胞壁龛微环境,采用免疫组织化学、免疫荧光染色、流式细胞检测及RT-PCR技术研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,探讨表皮干细胞周围生长微环境在表皮干细胞“命运”决定过程中的作用。
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结果: 表皮干细胞在从基底层经棘层和颗粒层到角质层的分化迁移过程中,经历了有序的成熟模式,这一过程与角蛋白的程序性表达密切相关;毛囊的发生、发育不仅与ESCs的增殖分化有关,同时受到毛乳头的诱导作用。改良的Ⅳ型胶原选择黏附法能够高效的分离表皮中的干细胞。这些细胞具有干细胞的形态特点表达α_6整合素,β_1整合素,CK19,CK14,p63,Nestin及PCNA为阳性,而CK10染色为阴性;激光共聚焦检测显示α_6整合素和CD71在表皮干细胞中的分布存在着区域性差异,可以作为区分标志之一,为ESCs及其亚群的分离与鉴定提供实验参考。
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! Q: i% \8 D/ B1 s结论:ESCs并非真正静止的未分化细胞,而是一种已经进入分化状态但是仍具有多向分化潜能的干细胞,其增殖分化行为不但受到自身程序化基因表达的影响,同时又受到其所处的微环境的调控。bFGF能够诱导表皮细胞在体外发生去分化,去分化而来的表皮干细胞与ESCs相比具有更加强大的分裂增殖能力,可以作为种子细胞应用于皮肤创伤修复与再生的相关研究之中。' Z) |7 T H0 ]- h9 x
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L' v' `; i% _! s% S李海红 付小兵：“表皮细胞去分化初步实验研究”（Preliminary investigation of dedifferentiation of epidermal cells ）INFECTION INFLAMMATION REPAIR 2006, 7(3）
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包皮皮片去除脂肪细胞后,用蛋白水解酶消化分离表皮,分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘连并冲洗以去除表皮干细胞.处理后的表皮片用DAPI标记后移植到全层皮肤缺损的BALB/c裸鼠,并局部应用重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),7d后用免疫组织化学法和流式细胞仪法检测移植存活皮片的表型改变.结果:用Ⅳ型胶原反复粘连并冲洗的包皮皮片CK19和β1整合素染色阴性;移植后7d,部分皮片柔软、红润,部分皮片干硬呈黑色,皮片存活率为58.3%;存活皮片CK19和β1整合素染色呈多层分布,而不是正常表皮中的单层分布;流式细胞仪检测结果示:处理后的包皮皮片(移植前)α6+CD71- 细胞占0.02%,α6+CD71+占0.03%;移植后7d α6+CD71-细胞占1.43%,α6+CD71+占2.82%,移植前与移植后α6+CD71-和α6+CD71+细胞比例有显著差异(P＜0.05).结论:细胞去分化参与创伤组织的修复,去分化源性干细胞可能成为一个新的干细胞来源.
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1 a1 j( D$ G: E3 `' e) {去分化的表皮干细胞与正常表皮干细胞具有相似的生物学功能
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研究发现，在一定条件下，人的皮肤表皮细胞可以发生去分化转变为表皮干细胞或干细胞样细胞，进一步研究确证了这种从去分化来源的表皮干细胞或干细胞样细胞在形态、结构和功能方面与正常表皮干细胞的相似性，证实这种去分化来源的表皮干细胞具有一定形成三维皮肤的功能，提示这类干细胞可能在皮肤修复与再生中发挥着重要作用。深入研究发现人皮肤表皮细胞发生去分化主要涉及Wnt和ERK信号通路，它们的激活可以导致去分化效应增强，而抑制则减少去分化的发生。研究提出在胚胎干细胞研究受限的情况下，以去分化途径来“制造”干细胞，可能是一条有关组织修复和再生的重要途径。
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蔡飒 付小兵：“在体诱导表皮细胞去分化的初步实验研究”（Dedifferentiation of human epidermal cells in nude mice） 第三军医大学学报 2008, 30(21) - B. y1 w: i$ z5 w, G' W
) Z/ `" U% Q2 w目的 在体诱导表皮细胞去分化,探索与表皮细胞去分化有关的信号通路.方法 包皮皮片去除皮下组织,用中性蛋白酶分离表皮,Ⅳ型胶原反复粘贴并牵拉表皮去除基底细胞层.处理后表皮片移植于裸鼠全层皮肤下,分别于3、5、7 d取出移植皮片,采用免疫组织化学染色、流式细胞仪检测、Western blot和RT-PCR等方法检测皮片移植前后表型的改变和ERK MAPK通路各信号分子表达的变化情况./ [$ D3 D, N" v+ P6 D5 Y8 W
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结果 去基底细胞层处理的表皮片干细胞标志物CK19和β1整合素染色阴性;移植后5 d,存活皮片CK19和β1整合素染色呈多层分布,而不是正常表皮中的单层分布.流式细胞仪检测结果显示,表皮片移植后CK19阳性细胞和β1整合素阳性细胞由移植前的0.00%分别增加到7.54%和5.24%,而CK10阳性细胞由99.62%下降为86.56%.Western blot和PCR检测也证实CK19和β1整合素蛋白水平和mRNA水平表达在移植后明显增强.ERK及上下游信号分子(p-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-myc)表达增强.t-MEK1/2和t-ERK1/2移植前后表达无显著差异(P＞0.05).% V* o; L/ |; X: i- U5 B
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结论 处于终末分化阶段的表皮细胞可以向干细胞状态逆转,这个过程可能与ERK MAPK信号通路有关.
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发表于 2011-4-27 10:49
发表于 2011-4-27 15:22
