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[请教] 求助 蛋白质电泳 [复制链接]

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楼主
发表于 2011-8-8 20:56 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
想验证CRP(五聚体)以及oxLDL/β2GPI、CRP/oxLDL/β2GPI这两复合物是否合成成功,其实就是想验证蛋白是否存在。应做什么电泳?
% }) @4 c  o  @8 N4 }: C" U5 {& q. n3 a; }3 b+ u
之前做的SDS-PAGE使复合物都降解成单体了,所以条带都不对。我现在不知道该用什么方法来验证这么复合物了?! l# I6 T3 W8 j: i
3 A; L' v; t/ A2 i$ S* m
请大家帮助
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沙发
发表于 2011-8-9 04:17 |只看该作者
用非变性胶(native gel) 和变性胶,分别鉴定复合体和单体,
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藤椅
发表于 2011-8-9 07:54 |只看该作者
可以做crosslinking,把蛋白连在一起。然后SDS-PAGE。1 M. ]. W7 Y1 |: v9 a$ Q6 q

) n/ d+ v: \0 W2 G非变性胶的麻烦是蛋白的电荷影响迁移。
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板凳
发表于 2011-8-9 09:02 |只看该作者
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分别作SDS-PAGE和native PAGE,然后比较两者的电泳条带数,即可知道蛋白质是由几个亚基或多肽链组成,以及每个多肽链的分子量大小
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报纸
发表于 2011-8-9 10:15 |只看该作者
回复 wang3033 的帖子4 V* a7 y' G" G5 S
! f. x: p+ L! f; G# E
可我的目的就是想看单体合成复合物了没 ;另外 如果做NATIVE是做哪种的呢
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地板
发表于 2011-8-9 10:24 |只看该作者
非变性胶蛋白质电泳~~~

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发表于 2011-8-10 07:02 |只看该作者
回复 philexchang 的帖子
( c; F1 P3 J1 W) a' C# J; i
, ~$ n0 f* [4 u7 `如果你是纯化的蛋白,做分析型凝胶过滤,确定复合物分子量,native gel受电荷影响不准
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发表于 2011-8-10 09:04 |只看该作者
用SDS-PAGE会使复合物或者五聚体降解,试试用大小排阻色谱分析法可以确定分子量大小。
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发表于 2011-8-14 11:09 |只看该作者
可以用gel filtration方法,证明几个蛋白成为复合物。
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