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[请教] 求助 蛋白质电泳 [复制链接]

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楼主
发表于 2011-8-8 20:56 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
想验证CRP(五聚体)以及oxLDL/β2GPI、CRP/oxLDL/β2GPI这两复合物是否合成成功,其实就是想验证蛋白是否存在。应做什么电泳?
* X! {! s' `; _6 {4 S3 W
: k( s# K! M+ P1 L之前做的SDS-PAGE使复合物都降解成单体了,所以条带都不对。我现在不知道该用什么方法来验证这么复合物了?
# q. I8 E) H( n/ y* V& L4 Z8 x0 ^9 @; `+ K  \/ O. ?
请大家帮助
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沙发
发表于 2011-8-9 04:17 |只看该作者
用非变性胶(native gel) 和变性胶,分别鉴定复合体和单体,
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藤椅
发表于 2011-8-9 07:54 |只看该作者
可以做crosslinking,把蛋白连在一起。然后SDS-PAGE。
9 S3 i# S3 Y0 |' t" R
# a: ~1 Z5 ?/ b6 I" n非变性胶的麻烦是蛋白的电荷影响迁移。
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板凳
发表于 2011-8-9 09:02 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
分别作SDS-PAGE和native PAGE,然后比较两者的电泳条带数,即可知道蛋白质是由几个亚基或多肽链组成,以及每个多肽链的分子量大小
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报纸
发表于 2011-8-9 10:15 |只看该作者
回复 wang3033 的帖子
. F4 [& J* |& D  b0 O: U. a; w3 H' f& k6 J& a1 y
可我的目的就是想看单体合成复合物了没 ;另外 如果做NATIVE是做哪种的呢
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发表于 2011-8-9 10:24 |只看该作者
非变性胶蛋白质电泳~~~

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发表于 2011-8-10 07:02 |只看该作者
回复 philexchang 的帖子
  z9 W0 Z$ ?- I1 N1 Z! {% X5 Q/ W; Y# o
如果你是纯化的蛋白,做分析型凝胶过滤,确定复合物分子量,native gel受电荷影响不准
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发表于 2011-8-10 09:04 |只看该作者
用SDS-PAGE会使复合物或者五聚体降解,试试用大小排阻色谱分析法可以确定分子量大小。
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发表于 2011-8-14 11:09 |只看该作者
可以用gel filtration方法,证明几个蛋白成为复合物。
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