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yaolinzhang

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金话筒优秀会员

楼主

发表于 2012-5-14 16:03 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

目的片段和连接质粒的浓度一般需多少？感受态效率需多大？

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沙发

发表于 2012-5-14 23:37 |只看该作者

连接效率，其优化条件：A）载体和插入片段的摩尔浓度比特别重要，载体：插入片段的摩尔数的变化范围可为8：1到1：16，但通常的变化范围是3：1到1：3。插入片段的长度和序列的变化会影响和同一载体的连接效果。每一个连接反应都需要作实验，来选择最佳的载体和插入片段的摩尔数比。在最小的反应体积中，通常一个连接反应用10-50ng的载体DNA。 B）进行连接反应时的保温的时间和温度也需优化。一般而言，平末端连接在22℃反应14-16小时，粘性末端在22℃反应3小时，或4℃反应16小时。5 y3 I d4 P4 e1 x# r( j
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