连接效率,其优化条件:A)载体和插入片段的摩尔浓度比特别重要,载体:插入片段的摩尔数的变化范围可为8:1到1:16,但通常的变化范围是3:1到1:3。插入片段的长度和序列的变化会影响和同一载体的连接效果。每一个连接反应都需要作实验,来选择最佳的载体和插入片段的摩尔数比。在最小的反应体积中,通常一个连接反应用10-50ng的载体DNA。 B)进行连接反应时的保温的时间和温度也需优化。一般而言,平末端连接在22℃反应14-16小时,粘性末端在22℃反应3小时,或4℃反应16小时。 Y5 q+ v7 V. R c7 I$ W* R
感受态效率:商品化的感受态一般都能满足您的需要。