“小二”归来——细胞复苏

泡沫清风

- t8 ^- m( ?  ]1 X3 @  H
( h$ R4 f  }2 K# p5 @  d" k不好意思，各位！由于我外出了几天，所以耽搁了！Sry！. u" t- T$ D* X

) {' a  Q+ {* i6 O" S我是上周6早上复苏的细胞，但由于周末出去，所以没有空上网来发帖，因此把这三天的一起发上来啦！5 O, W+ d" L, F  }
) f6 A1 F1 Z. J7 z5 @& g6 K
接下去几天的实验中，如果大家有什么疑问或者建议，请提出来哦！
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- Y. d. V6 C* f' c7 L1 O! q/ I1 [4 r) K6 {# A7 |2 u1 l" v+ R
第一天还是复苏：* M, a$ S* }" X) Z- y! ^
实验准备：) j7 K$ w% G5 j" f  }1 _! }6 x
（1）DMEM：Gibco（高糖）  3 d6 |' e2 u" e
（2）FBS：HyClone0 G* |, y$ y0 E2 p, t
  培养用DMEM+10%FBS
* @% Z  U4 Z( r9 K
5 p: F! ^  v8 W/ S& U实验步骤：
% m0 \) w6 y9 m. \（1）在15ml离心管中加入5ml常温的培养基（293T细胞怕冷，培养基最好在水浴或常温中放置一段时间）
9 u$ v2 T' e7 |7 ^（2）37度水浴复苏一支293T细胞: z6 X; [2 z  R* j2 o+ A
（3）将解冻的细胞液（1ml）转移至5ml培养基中，轻轻吹打数次
: M# i) d3 Z3 p9 [, h- V9 W' W: b6 J（4）1000rpm 常温离心5min& l4 @3 |2 u  r. t/ b. c6 `9 V, m& \
（5）在一个T75培养瓶中加入10ml培养基，浸润内壁。8 `1 _  i# @! |/ e
（由于这支细胞冻的时候是根据T75的量冻的，所以直接复苏到T75瓶中）
5 e5 Y& r: ]% H) R- m( v（6）离心完，弃上清，加入新鲜的培养基5ml重悬，轻轻吹打数次。接种至T75培养瓶中，轻轻摇匀。
3 z' x2 H3 V- t. B6 U. F（6）放入37度，5%CO2温箱中培养。（培养瓶盖勿拧紧）

hualin840518

顶

sajia

学习

鹤之舞

1# 泡沫清风
; g5 ~/ Y  ?" o2 _
) G1 |3 G1 P* P3 Z( X1 y
4 M4 l+ Q8 f& Q7 l6 X非常感谢

joicie

支持~~~~~

mmssyyee

冻存的时候一管里有多少细胞啊？加入5ml的培养液会不会有点多啊？

泡沫清风

回复 6# mmssyyee . h, }5 _3 g0 p; z. s: _
细胞数3*10^6左右，具体不清楚了。我都是凭感觉冻，不怎么计数。
) h" N+ x. G8 i+ q一般复苏细胞的时候用3倍以上的培养基复苏

mmssyyee

回复 7# 泡沫清风 ; x, e# I4 G- [; z+ _
, w8 w# {* r) ~
- f/ O, K2 A3 i( ?5 k" H
    谢谢！

camel_stone

一般我组复苏细胞，会在一分钟内使其完全溶化，所谓慢冻速溶。

dlhhhhh

我来顶顶、、