第三天（8月17日）中午观察细胞，并消化传代

泡沫清风

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第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞* e- ?8 T! Z5 B8 m3 n. @0 n6 i/ O
- m, C: ~" O$ c. h7 T. |! d0 A% f

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不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：
6 c' V2 k$ _& @# W
" k3 n! R, e( m* f0 Q" a实验前准备：4 R# s9 g, [5 @# `4 H
（1）DMEM+10%FBS6 g( |3 T% }" p5 T3 G1 X
（2）PBS
: ^# S& H2 G% I, B（3）0.25%胰酶0 G, [( J. v1 }! t: T% A' z
（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）) a& z% v, J) A! U. k' s
5 Y, S8 H9 r* a
实验步骤：# c, l. K/ `* h1 i' ]1 n5 n) V
（1）弃去T75瓶中的原液。
% U  I9 V+ v, {0 t7 g: U$ D（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。+ ?7 p; z& x7 T% d
（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。+ |% w& B, p4 b: r& y
（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。- |0 V6 R* r+ ?0 U
（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。
  s7 n) e2 u6 [- t* G& f- Q（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。! L- V$ j2 N; s
（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。+ n1 S; ]' J7 j
（8）放入温箱培养。
" r4 G" d2 q% r8 O% r$ ]# V(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。)

have-a-rest

有个问题，293培养基中需要添加丙酮酸（钠）吗？抗生素呢？4 f) g6 K# E$ }+ ]1 h2 {. D) h$ ]
一点建议：胰酶里面添加一点EDTA，也许就不需要吹打那么长时间了。

hualin840518

good

hualin840518

图片是用成像系统还是相机照的？

mvirus008

持续关注

mvirus008

有个问题请教一下：
5 j# X2 o" Q3 S4 d7 e这个细胞传代能否简化一下,(胰酶消化后直接加培养基把细胞吹散分装，省略掉离心再加新培养基再分装)，不知道这样行不行？

难得胡涂-1

能不能消化后先倒掉胰酶，加培养基再吹细胞？这样也不用离心啊！

泡沫清风

7# 难得胡涂-1
7 N& M) m  G8 O& y* @( C5 R把问题发在疑问贴里吧，这样我不用找。我的回答请到疑问贴去看吧

chenghoby

好的

轩辕之客

支持下！！！！