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本帖最后由 泡沫清风 于 2009-8-17 15:56 编辑 & x4 d7 h' u* v h* Z
2 S1 z* _. G; W" R, q第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞3 Q; y8 m' Q% ~" j. p: D
9 A' a6 M8 u: I: Z8 P1 d: ?0 ~% p2 h$ J) H3 E1 _& H0 v+ g
不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：8 U+ ~9 t/ i/ C
2 b% g: L( D& r5 h& P
实验前准备：
' a- P s5 L, j' h2 e& S（1）DMEM+10%FBS
+ f$ b- m# [& k* [ J; u（2）PBS
6 _' q- C% C# @, H. [. A. z（3）0.25%胰酶
( H1 q/ Y! e, n（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）
: {) ~, F- ?$ v# b# {
, t5 Q# \$ p# o/ u, h; \: Z实验步骤：& n5 O3 @. ?) I2 O" t8 N/ ~
（1）弃去T75瓶中的原液。# b$ f# p% A8 Q3 o6 U3 @/ K) Y" A
（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。
& U* A/ b |4 u' B（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。
' O8 ^" G: r3 Y# M& o（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。2 m( H. R" d/ k( e* _& I
（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。- [# p) I& J* L
（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。
+ ^1 J' F0 h K9 ?% P（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。
6 r0 f! S$ \9 o& k7 T1 @（8）放入温箱培养。/ m2 b0 r: u3 @* J6 `( m( g
(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。) |
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发表于 2009-8-17 15:46
发表于 2009-8-17 17:04
