求助：我养的小鼠BMSCs原代消化困难

xihuzi0217

我养的是小鼠的BMSCs，3周龄小鼠，雄性，48小时首次换液，以后每隔3天换一次，大概7天能融和80%，用0.25%胰酶消化3分钟，都不下来，细胞才稍微有点变圆。用的血清是GIBCO胎牛血清15%浓度，Hyclone培养液，胰酶是国产的。跪求高手指教，怎么才能使原代消化容易些，我已经被这个问题困扰2个月了，谢谢谢谢！！！！

stefan

楼主用进口的胰酶试试，加上EDTA，进口的应该含有EDTA,进口的应该不错,我用过国产的，效果真的是不敢恭维啊！祝顺利！！

267318024

我也不知道有什么好的办法，增加消化时间看看，我同学也是遇到这样的问题，结果传代后细胞生长状态不好，确实比较头疼！

shuangor

请确定用PBS洗涤2遍了么？* r& X  L4 ~9 k; [$ Y

4 M7 \  C8 ^3 Y' e5 P. l8 H在消化过程中拍打了么？
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9 K! v' [; r1 `  f! o( q/ D9 h# |4 W我惧怕使用含EDTA的胰酶，对细胞壁损伤极大！做流式明明白白可见！
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! @" r0 m+ J7 y拍打+数次吹打，不行的话那就换胰酶！

morning860

可以考虑换进口的胰酶，且消化过程中拍打培养瓶。但是要注意的是胰酶消化时间对BMSC影响挺大，时间太长BMSC会提前衰老，生长状态极不好！

gxbzj吉祥草

在37度培养箱中放一分钟，然后显微镜下观察，反复数次，这样会好些。还要敲击培养皿壁啊。