病毒感染细胞问题

huangcong1988

收集病毒以后，用100KD浓缩柱子浓缩，大概能浓缩10~15倍，一般就是15ml病毒上清能浓缩到1~1.5ml，浓缩后的病毒感染成纤维细胞发现，在4×的荧光视野下完全看不到荧光，但在10×视野下能看到微弱荧光，我是用的六孔板，一个孔里面加300μl浓缩后的病毒夜，为什么感染效率这么低？我还加了polybrene，浓度为10μg每ml。病毒滴度应该不很低啊，因为当时收集完病毒之后，照过荧光，很亮。感染过293T，也还是比较亮。为什么感染成纤维就不亮呢？

varing

感染原代细胞本来就比较难。我现在也是这个问题，48小时后在20×的视野下才能看到荧光，293太容易感染了。我的没浓缩，很大的原因是病毒滴度不够，也可能是MEF状态不好。我打算把细胞铺稀点，然后多次感染来克服。

yueweilei

呃，想问下用的什么病毒啊？用来做iPS？, m/ y" F( s" A0 a% n3 `9 w

huangcong1988

回复 varing 的帖子- `6 i' H0 I" f4 F- D% B
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滴度不够的话，浓缩了啊，用浓缩柱浓缩了，浓缩后的病毒，加的量还不少，再感染，结果也还是不好

huangcong1988

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恩，是的，慢病毒

yueweilei

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哦。我们用的逆转录病毒。不过，慢病毒好像可以通过高速离心1h-2h，进行浓缩。

huangcong1988

回复 yueweilei 的帖子6 Z3 F) w8 c+ a

4 P4 z. A0 Y5 q& U/ I逆转录病毒系统我也有一套，不过逆转录病毒的没带荧光，只有一个control。我用柱子浓缩，你逆转录病毒感染效果怎么样呢？

yueweilei

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4 ^) x' u$ }2 W8 W5 e5 r+ q5 D6 }9 l2 \* D
我用12孔板做，每个孔一般能有二十个左右的ips克隆形成，应该还行吧！

huangcong1988

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/ f) H( Q9 K- `5 s, g/ T多久形成colony？还有你病毒加入量是多少？

yueweilei

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没测滴度啊，不知道具体是多少。四因子的话大概十几天吧。