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实验室常用染色液配方
# g# [& L, ]: s$ @; ]
7 J. x! G: A5 z6 x9 O, f3 N) e9 C- e7 K" h+ U) M
1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液
; }, S7 c, {- h9 o) WA液:美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精 毫升
) _% H) U% s1 e2 a% c EB液:氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水 100 毫升分别配制A液和B液,然后混合即成。
( J9 @6 P2 n7 O: w" d2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液
& @0 h5 ], }) H1 M, x* bA液:碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精 10.O 毫升7 W& a8 t6 t8 D: o& I3 x
B液:石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水 95 毫升
9 w1 z$ j! T) s& q) _将碱性复红溶于95%酒精中,配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中,配成B液。将两者混合即成。; e+ s# l6 N& M8 W/ d" m+ q
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液:结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精 25.0 毫升. ?; i( Y, p9 l3 F. ^' Q9 C+ C
B液:草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水 100 毫升
' W# C; j- E* k D将结晶紫研细后,加入95%酒精,使之溶解,配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水,配成B液。两液混合即成。- e% K$ B: U4 y% ~4 U5 `
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘 1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水 300毫升
* Y# m. }7 E9 z, G先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,溶时可稍加热,最后加足蒸馏水量。
6 Z9 u; d' F, X I1 j5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克 蒸馏水 100毫升/ E! a# m; \: T! c5 g0 V
6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水 100毫升先将孔雀绿研细,加少许95%酒精溶解,再加蒸馏水。
: i `6 W& \ m( v* y9 F3 \7 w5 _7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水 100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟,加入福尔马林作为防腐剂,用玻璃棉过滤。+ H V/ M$ X* d% _9 a6 _
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水 100毫升* T7 ]# x8 }' V& |
9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水 95.06 ]- ?. o A+ v4 a8 a4 `8 g" c( O" \4 j
10、乳酸石碳酸棉蓝染色液(真菌制片,短期保存)石炭酸 10.0克 甘油 20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升 棉蓝 0.02克蒸馏水 10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化,加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,溶解即成。4 L8 k* A* }7 D, G9 T, l3 `* Z
11动物组织石蜡切片染色方法7 G0 p, Z5 m& }% B
苏木精-伊红(HE)染色:二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min,依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min,蒸馏水洗;入苏木精染液10 min,盐酸酒精分色4 s,自来水洗10 min;依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min,入伊红染液染色10 min;入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明,中性树脂封片.
; G5 M5 X+ w1 q5 M8 Q6 j- Z1 F& ^ D: |8 W# S: m
. Z8 @0 P$ N' T
一、常用染色液的配制 ( `; c1 _3 [9 \5 J. f2 _, }
⒈ 碘-碘化钾(I2-KI)溶液 能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂。 ; q% D9 d1 l; r
配方:碘化钾2g ; 蒸馏水300ml ; 碘1g ( V( d' i: l6 T [4 k( Q
先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至300mL,保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍,这样染色不致过深,效果更佳。
/ f" I( U; x; p, p$ v2 y3 D6 _" F⒉ 苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ) 能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色剂。 % i7 c8 s0 k: s1 ]1 H4 w
配方:(1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ; 95%酒精10ml ; 过滤后再加入10ml甘油
6 {8 t4 n {6 g9 e( i(2)先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml。
# ~9 {3 k9 V: b, \(3)苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。 f& t% b& M+ E0 G* p
⒊ 1%醋酸洋红(aceto carmine) 酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。 * u" X p2 I7 Y: ]$ |+ A% }; t6 v! u2 |4 X
配方:洋红1g ; 45%醋酸100ml
$ X$ }: e6 W/ C/ H$ x$ P' H3 E煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4%铁明矾溶液1~2滴(不能多加,否则会发生沉淀),放入棕色瓶中备用。 9 f7 y* P7 o1 Q" x; u. H) H$ D' p
⒋ 改良苯芬品红染色液(Carbol fuchsine) 核染色剂。 : ^8 Y* Y. p/ M7 {6 C& y
配制步骤: 先配成三种原液,再配成染色液。 $ p: F8 n+ U& ^* {) s( M
原液A:3g碱性品红溶于100ml 70%酒精中。
% r8 b# o5 k# a/ ~( E原液B:取原液A10ml加入到90ml 5%石炭酸水溶液中。
, B/ j( h% U W5 i# C3 c原液C:取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林(38%的甲醛)。
. @; w+ v7 E* `/ Z. n" ?3 ?* y(原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用) 0 c+ ]9 U: t4 N2 u- U
染色液:取C液10~20ml,加45%冰醋酸80~90ml,再加山梨醇1~1.8g,配成10%~20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则着色能力差)。
4 X) m z; h7 q2 h4 ~. s适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2~3年不变质。山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差。 |
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