这里基本没人有拍细胞的电镜照片？

jiojoo

刚搜索了一下，基本没有人做细胞电镜
8 ~+ J/ W5 }4 X难道大家都不需要看细胞的形态？# m% Y: [2 V5 q7 W2 x+ A
我想知道细胞样品制样时需要注意的问题9 B) _0 m3 L; S; a6 `
我一般见到的是用固定剂固定，然后酒精脱水，自然风干，但是效果很一般，做不出漂亮的图片来
) @2 Z* c/ p) I$ z  V) [细胞固定后真空冷冻干燥不知效果会不会好一点？另外冷冻时细胞会不会被冰晶损伤？
! {% J2 j2 A$ r. {9 ]0 }: o9 A/ S有做过或知道的来分享一下经验吧

gqs2872022

不知道楼主想做哪方面的研究？
. C9 p5 T5 N, d3 q1 g一般来说，看细胞形态的话做常规病理切片HE染色就行，
& B0 U: @- Y7 H8 P* \这里有两种状况，如果是一般的培养细胞，贴壁细胞的话# ~" @; }  I# x  j* r
用盖玻片培养后染HE或者做组化、杂交之类的，如果是
( J1 f- ^, X# X: W( ~- a/ W8 D悬浮细胞的话可以用细胞甩片机甩到载玻片上。
$ r  n& ~# b% r$ j6 t然后再进行HE或者做组化、杂交之类的实验。
0 g5 w6 E+ {. W: W( e% V$ T6 F另一种是干细胞方面培养的细胞团块，可以做冰冻切
5 X0 K  ~# C; B+ Y, a4 h  a片后染色或者做石蜡切片也行。至于说具体怎么做，- v9 k, D& C! j; v+ x# i8 @5 d$ E
这是技术人员的事，我想作为我们知道怎么去利用这些$ g5 p- ~9 x0 ~7 b/ |/ W+ m
方法去完成或实现自己实验就行了。2 ^+ A8 y, E2 l* l
% R! b  B. Y7 ^7 q
如果是想研究细胞内细胞器的发育或损伤情况可能才需用到电镜。
' Y% n/ l7 I7 a# t但楼主说的流程又不是电镜的流程，所以可能楼主是混淆了概念。
1 \0 t3 x2 J/ Y7 r( u& R3 [普通显微镜和电镜是两种不同的东西。6 h! H! L7 J9 f" ^- j7 ~& h( U

" ?+ c( `! M" ]* ^; m0 D不知道我的经验对楼主有无帮助。
$ S4 y$ }1 Q  Z: y5 r  Q/ ]  ]8 X$ R& e

jiojoo

回复 gqs2872022 的帖子! b- \1 x+ a2 @) n6 J9 ^. x

8 ^, _9 X! d* K! Q7 ?我没说清楚，我说的是扫描电镜的制样1 h# f9 b  @1 |! o/ @( }' K5 v
因为我不是单纯的细胞实验，是细胞与材料的复合体，需要看细胞的形态及分布

gqs2872022

回复 jiojoo 的帖子/ J+ Q9 x- e! B5 w) X

2 b  x5 {& A8 p& `9 o呵呵，你们的电镜制样也需要自己去弄吗？, m+ Y* k3 K1 G# ~
我认为那是电镜室工作人员的事，
9 |6 \3 W/ A' I# e你只需要把取材好，选择好需要观察的面，
8 u+ O! A. u, |) d4 ^/ f; R1 S. b用2.5%戊二醛固定好就行。
; I% R9 o3 C/ }5 y! [% d4 f0 }3 W  T3 J) s
一般地：扫描电镜：取材，漂洗，2.5%戊二醛固定，; m, d, ]- y0 g- w* M/ P% i1 Y. n
漂洗，1%锇酸后固定2h，漂洗，
( I5 b% ^% J: ~0 a" m梯度丙酮（50%、70%、80%、95%、100%）各15min脱水，
( x- l, M; @% v6 i7 T0 W. {: |乙酸异戊酯置换或叔丁醇30~60min，临界点干燥（或冷冻干燥），
( t! }% f, U  v3 x0 f( Z, C镀膜，观察。1 O. x5 G: P  w0 F; H2 |$ w2 s/ I: J
" B, l" A& e1 \) W( m& e0 y
扫描电镜图像有4个方面的缺陷：荷电效应，损伤，污染，边缘效应。
( L" W" ]; Q  |, a# S& ^/ e% w& B7 S* a9 a  r" C
建议楼主把技术活还给技术人员，像这种分析植入材料、; O1 c" Z9 L( d9 K
植入支架等他们做得多，自然会处理好你的样品。你等着要结果就行。

jiojoo

回复 gqs2872022 的帖子) l' C3 W8 V: s- |& F3 j8 D$ b
1 l, _1 W! u$ \7 X; M) o0 A. K
谢谢' l; a+ ^% D2 B7 ~  K+ ]
我在这里基本所有的活儿都是自己做，连扫描电镜也是自己操作

embryonic12

回复 jiojoo 的帖子8 f/ S5 e: u9 F3 l( H3 R0 C
* W. A" Y* v2 E0 `6 s5 ^8 t) _0 }
建议你查一些材料学方面的期刊，比在生物方面找命中率大。polymer， macromoleclule rapid communication，bio polymer， macromolecule 等杂志中经常由于你雷似的工作。