神经球如何制成单细胞悬液？

小渝

各位老师，想请教下，我目前养的是原代神经干细胞，现在需要传代，参考大多数文献说直接机械吹打，因为胰酶好像对其影响蛮大，我试了下，发现吹打了十来分钟发现神经球虽然变小了，但是还是存在，另外也试了用胰酶消化吹打，由于怕血清诱导分化所以只是用缓冲液和培养基洗了几遍，镜下观察发现还是存在神经球，而且细胞状态不太好。不知道各位老师有没有什么好的建议呀？如能回复不甚感激！先谢过了呀！

殆死悲爱

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1 g9 m; {4 v/ z. o3 S1 L2 a2 p" j
/ {: s) z& o/ D' U4 |0 pTrypLE，胰酶替代品，不使用血清终止消化，所以传代过程中不会有血清影响。

birdflubirdflu

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) F7 g/ Y- N- G. j  ^0 ]3 n6 j7 h7 A
一般加TrypLE

nek314

$ @1 l- J, u( ~! o  H- K可以参考这种方法，对神经干细胞制成单细胞悬液非常有利。能保持细胞活性

asa_ok

我们用胰酶消化加机械吹打，5分钟内搞定，不用血清终止而是用PBS稀释后离心，效果还行。

小渝

回复 asa_ok 的帖子- V% o  v% X6 t3 L! @* P
) \. R8 B- @# k! c  S  Q( }
非常感谢!想请教下大概浓度是多少哩？直接加进去然后就吹打是吗？我就是这样做的，不知道是不是浓度控制不好还是怎样的，细胞状态不太好哩！

小渝

非常感谢各位的建议！非常受用

birdflubirdflu

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& A) c" U' M  \/ H5 K5 @
& Z8 k  p: F6 H4 B5 s$ X/ {6 e看文献用的是TrypLE（Gibco，12604），no phenol red 的。不知12605含 phenol red的可以用来打散神经球不？
1 ]1 R% q" N( s% V+ z5 x另外，trypLE消化散的神经球是在不经处理的petri dish里继续悬浮培养吧？

殆死悲爱

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, o, G" m7 h2 r) E7 Z
# l3 [# @8 q! H* S. [! T# Y可以的trypLE（gibco，12605028）。再继续培养就要看你是想得到monolayer还是neurosphere了。

birdflubirdflu

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' i% R  d3 z& }# v" d' d" F
* u" l9 P; }& K* HtrypLE消化后还是在不经处理的bacteria culture dish培养，一天后发现neurosphere还没形成，都是细小的悬浮细胞，是要五六天后才能形成neurosphere吧？