神经球如何制成单细胞悬液？

小渝

各位老师，想请教下，我目前养的是原代神经干细胞，现在需要传代，参考大多数文献说直接机械吹打，因为胰酶好像对其影响蛮大，我试了下，发现吹打了十来分钟发现神经球虽然变小了，但是还是存在，另外也试了用胰酶消化吹打，由于怕血清诱导分化所以只是用缓冲液和培养基洗了几遍，镜下观察发现还是存在神经球，而且细胞状态不太好。不知道各位老师有没有什么好的建议呀？如能回复不甚感激！先谢过了呀！

殆死悲爱

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% X7 Z* u7 E8 N4 f" U: aTrypLE，胰酶替代品，不使用血清终止消化，所以传代过程中不会有血清影响。

birdflubirdflu

回复 小渝 的帖子. S4 a+ [% o, c0 A: F' V# y

& p4 V) }$ k  R+ x; d: m 一般加TrypLE

nek314

: U8 o0 A7 H5 r- |4 G- a
可以参考这种方法，对神经干细胞制成单细胞悬液非常有利。能保持细胞活性

asa_ok

我们用胰酶消化加机械吹打，5分钟内搞定，不用血清终止而是用PBS稀释后离心，效果还行。

小渝

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/ l9 H6 k: U: Z0 k7 L
4 y" e( y, O1 I1 @( g$ ^- V6 L非常感谢!想请教下大概浓度是多少哩？直接加进去然后就吹打是吗？我就是这样做的，不知道是不是浓度控制不好还是怎样的，细胞状态不太好哩！

小渝

非常感谢各位的建议！非常受用

birdflubirdflu

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看文献用的是TrypLE（Gibco，12604），no phenol red 的。不知12605含 phenol red的可以用来打散神经球不？ 2 Q6 ~& G! o0 W
另外，trypLE消化散的神经球是在不经处理的petri dish里继续悬浮培养吧？

殆死悲爱

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可以的trypLE（gibco，12605028）。再继续培养就要看你是想得到monolayer还是neurosphere了。

birdflubirdflu

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: O2 u% O' L) G3 T/ Y/ rtrypLE消化后还是在不经处理的bacteria culture dish培养，一天后发现neurosphere还没形成，都是细小的悬浮细胞，是要五六天后才能形成neurosphere吧？