求指教：PBMC分离完有红细胞

lybai

1 X) u+ r" s8 M' Q! c5 o! H我们的主要操作步骤：. }; U1 J" R6 I- g" \+ Q
1 10ml全血用10ml 1640培养基稀释，轻轻混匀; l  [! v; s5 S9 S+ n0 e
2 稀释的血液20ml缓慢加到20ml淋巴细胞分离液（Gibico）上。1500rpm/min, 30min,
- k7 ~0 h& f1 `0 b4 l9 F- A4 b4 o3 吸取白膜层，然后1:1用PBS洗。2000rpm/min, 10min,+ ]+ w( S2 W+ E5 D
4 弃上清，再次加20mlPBS，吹散细胞，2000rpm/min, 10min
9 n# J& l' e$ R) T+ `) N; x4 \5 最后加2ml PBS,计数。
8 z: a7 m$ F  l% B5 T" F% V2 O; G! n! l. C1 y; P
细胞悬液离完心即可看到底部有明显的红色沉积，显微镜下也能看到红细胞，求教各位大神，
- i0 j4 |8 {, H" B0 Z' f3 `! m1 我们第一次离心的时候，转速是不是有点低，我查了一下，我们的转速相当于400g离心力，其它有的人用800g,或2000rpm，我们也试过500g离心，离心完之后，细胞很难吹散。
7 \* b4 {( o+ @8 d2 稀释血液和淋巴细胞分离液的比例，我们用的是1:1，看别人用2:1~3:1,这个对试验影响大么？