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7 s& }4 ^% B4 v7 H P
我们的主要操作步骤:$ v1 n8 q1 w7 h9 { H2 {1 I' F
1 10ml全血用10ml 1640培养基稀释,轻轻混匀, r, y$ p8 o: X& s6 n, D
2 稀释的血液20ml缓慢加到20ml淋巴细胞分离液(Gibico)上。1500rpm/min, 30min,3 U D% S' E7 ^4 U( P9 V
3 吸取白膜层,然后1:1用PBS洗。2000rpm/min, 10min,
* O1 o5 k& y1 C4 E7 M: M% i4 弃上清,再次加20mlPBS,吹散细胞,2000rpm/min, 10min
5 L4 v: q! Q( ~( V/ g* P5 最后加2ml PBS,计数。3 k p- n1 e4 A* P2 ~ e8 d
, Q% r9 E b( S% W5 r
细胞悬液离完心即可看到底部有明显的红色沉积,显微镜下也能看到红细胞,求教各位大神,
8 p. B. F& ^2 v$ Z2 y1 我们第一次离心的时候,转速是不是有点低,我查了一下,我们的转速相当于400g离心力,其它有的人用800g,或2000rpm,我们也试过500g离心,离心完之后,细胞很难吹散。
! V8 q% u* l% f, h# [ w2 稀释血液和淋巴细胞分离液的比例,我们用的是1:1,看别人用2:1~3:1,这个对试验影响大么? |
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