第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒

泡沫清风

1 J& f  X, [$ D. @( W6 M# b- I) t+ z
2 X: w6 l% J5 i8 v9 K
铺皿后19小时左右，观察细胞密度：
: a* N8 w5 v$ \, ?

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4 t' o* r7 ?$ ?, R9 R
3 n# F  Z/ D4 q6 X' f
实验准备：
: Q9 Q2 ]( T; n; C" m& F4 |: p1、培养基：DMEM+10%FBS1 l/ A/ W; t% A) Z' {* z; f3 \4 N: H
2、lipofectamine 2000 （invitrogen）5 L+ {( u/ Y) J4 b! X) L! o" H
3、OPTI-MEM （GIBCO）
0 l5 w" }6 J3 J2 Q" I: h9 ~4、质粒  g- k2 T/ l3 C1 o- ^. u  W. Y; \
   两个目的质粒：MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP* P+ p2 Y) ], C5 Q
                        MSCV-IRES-GFP2 i# `6 B" A* n4 p( ]% s3 Y# ~
    两个包装载体：pKat和pCMV-VSVG4 M4 D5 t9 T$ V: C
3 Q/ K! k0 m& B$ }6 n. _
实验步骤：
2 z+ T$ B) T2 n5 p5 N1、弃去6个皿中旧培养基，各加入4ml新鲜培养基。
3 m8 ?2 ]  S: @3 Z: J2、制备质粒-lipo 2000混合液：$ [( m0 H, p4 g' k9 H
（一个10cm皿我用质粒的量是10ug，lipo2000的量是20ul，OPTI-MEM 1ml，6个皿中其中4个皿用来转染MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP，另外两个皿用来转染MSCV-IRES-GFP作为对照）
- H+ v9 E8 q0 h: \5 u3 {
; d* s* O; q. Q# j- S  （a）取一个4mlEP，加入120ul lipo2000，再加入3ml OPTI-MEM，混匀，室温静止5min。（6个皿的量）
' J# n0 j4 H  v$ F- P* k   （b）取第二个4ml EP，加入MSCV-IRES-GFP 10ug，Kat和VSVG各5ug，加入1ml OPTI-MEM。（2个皿的量）. _( D3 w  m: _( V, S
  （c）取第三个4ml EP，加入MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP 20ug，Kat和VSVG各10ug，再加入2ml OPTI-MEM。 （4个皿的量）: S. G8 i/ i, ~  t
  （d）取（a）中1ml于（b），其余2ml到（c），混匀，室温静止20min
! p) i3 c- C( ?( W! y3、在1-4皿中加入（a）与（c）的混合液各1ml，5-6皿加入（a）与（b）的混合液各1ml，注意一滴一滴加入。这样每个皿都为5ml总体积。
; C' s' t3 T1 ^+ f5 w* ^4、放入温箱培养，到6小时时换液。