第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒

泡沫清风

+ N/ K: o; U' z' Y& k$ u9 B$ Q/ L6 q

: t3 F/ A, B+ ?铺皿后19小时左右，观察细胞密度：
1 [, O0 T. W% @, ^. s" A

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/ M9 C. R  T) b  S, `! u
# R, g3 F' F! E9 J实验准备：
; |* w& {# O/ @6 [; [1、培养基：DMEM+10%FBS
3 A  p+ ~! }5 F( G* z' Y2、lipofectamine 2000 （invitrogen）% {3 ]1 A: M, T# y0 i
3、OPTI-MEM （GIBCO）; a- y+ T* D/ {% R- t8 V
4、质粒
' {" y3 t7 U! q# O   两个目的质粒：MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP
$ L- z5 O, y7 T* Y9 j  E9 O; C                        MSCV-IRES-GFP+ |4 R7 q: r6 V  G+ h: a
    两个包装载体：pKat和pCMV-VSVG
) P/ Z/ _) Z, n: W* X; N7 m0 e
' x; s4 j9 @% O: u4 \实验步骤：/ H3 f2 o) `8 w3 e2 N
1、弃去6个皿中旧培养基，各加入4ml新鲜培养基。0 Z) K, a" y5 z* j
2、制备质粒-lipo 2000混合液：9 F3 a& o% A: Q0 L8 m* `+ r
（一个10cm皿我用质粒的量是10ug，lipo2000的量是20ul，OPTI-MEM 1ml，6个皿中其中4个皿用来转染MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP，另外两个皿用来转染MSCV-IRES-GFP作为对照）
! m) |2 k3 R2 @: y  G: M
* g6 ?* {7 r. {  （a）取一个4mlEP，加入120ul lipo2000，再加入3ml OPTI-MEM，混匀，室温静止5min。（6个皿的量）, l; z3 N2 u: c: \. f
   （b）取第二个4ml EP，加入MSCV-IRES-GFP 10ug，Kat和VSVG各5ug，加入1ml OPTI-MEM。（2个皿的量）$ M7 G) ^- Y% ?) y" A
  （c）取第三个4ml EP，加入MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP 20ug，Kat和VSVG各10ug，再加入2ml OPTI-MEM。 （4个皿的量）
# z  p6 n4 ?. |8 G& t4 ]  （d）取（a）中1ml于（b），其余2ml到（c），混匀，室温静止20min9 y6 {/ C9 L, J/ o' F
3、在1-4皿中加入（a）与（c）的混合液各1ml，5-6皿加入（a）与（b）的混合液各1ml，注意一滴一滴加入。这样每个皿都为5ml总体积。
0 P' u' }* ~5 G5 u# d$ ?6 V; P4、放入温箱培养，到6小时时换液。

轩辕之客

沙发！！！

细胞海洋

图片很清晰，内容很详细，谢谢

mvirus008

see see

john8707

期待啊~

biowx

hualin840518

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cortex

xiexie

chenghoby

老师辛苦了