细胞培养问答

细胞卡也

1 冷冻管应如何解冻？
$ P3 l4 L+ C: W# X& A取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。
5 @" u# I$ P* W4 V2 Y3 k3 ~2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？" c8 f) s7 f- {* Q5 K
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。3 g1 E1 j2 r9 S% ~9 _8 }8 S
3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？  Y8 l+ R+ V2 y3 _: V
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。
# y+ y) Y% s( f3 n; O4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？/ b# k) u5 r! c4 X" [* @
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。- L& y! I4 [, W: \% z
5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?
7 y( Y' N+ n; P* Z. r* `FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。
( o9 B( k4 W+ Y1 u+ ~# d! `' s% E6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？
& f% |/ X0 H7 A5 c* G一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。
; i& I8 a3 j- T2 }: ?$ ~  F7 何时须更换培养基？) L- r, m( Z# Y8 |) C
视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。* I9 x- Y% O2 z' J7 c, }
8 培养基中是否须添加抗生素？8 U' c9 a: l6 B! }; ~
除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。1 i7 [! f3 D& T( ~* F3 ]
9 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？
, v# S* Z$ _/ l6 n" s) d! w一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于–20 °C，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低， 并可减少污染之机会。

大胖子阿哥

为了防止冻存管爆裂   我建议先放入-80度冰箱30分钟

好雨知春

回复 细胞卡也 的帖子: k' f" T" N7 _% ~5 K) L7 e4 A

/ J7 \, F4 k3 q5 D0 D- X+ i& r很好 学习了

xingyanchao