慢病毒感染人的间充质干细胞技术交流

yeshch

各位家友好！最近在准备慢病毒感染人的间充质干细胞（MSC）的实验，打算通过Lenti-virus对MSC进行基因的稳转过表达，恳请有经验的家友分享相关经验：
6 t( ~  `, r- q) U4 n+ U1. 常用的MOI是多少？( e9 B; w7 _+ z/ a8 v
2. 如何感染效率更高？
  B" o8 B3 h9 F+ }3. MSC的接种以及长到什么密度适合感染？/ w+ r) ?5 ?/ c
4. 感染最佳时长？
8 Y( n# o  P* R# }5. 感染后细胞状态怎样？是否会影响增殖，感染后能够继续传代培养几代？% N2 O# q9 L) Y2 n- t
······提供经验分享或者相关资料9·8·5·3·4·0·2·6·2·@·q`q.c`o`m都可以哈！提前谢谢各位家友啦！

fm100200

生长融合80%左右，24h-48h，会影响细胞增殖

yeshch

没人理就自己顶个贴咯，快来人呢

liuyasi2008

细胞密度50%-70%；MOI值50-100；感染时高浓度病毒孵育细胞，过夜感染，换液；感染后一般不影响状态。

yeshch

回复 liuyasi2008 的帖子# m( q7 L) G$ T0 e6 x& V

% U4 X( S: E6 M1 g谢谢，但是moi这么高细胞状态不会受影响？请问您有没有数据支持呢，或者发表的文章？

yeshch

回复 fm100200 的帖子
8 V) ^5 u9 D" y1 o' I/ p2 N
1 e9 C6 u( e* b9 QThanks♪(･ω･)ﾉ

liuyasi2008

感染过这个细胞，感染效率80%以上，传了一次代，收细胞做了PCR检测。可以感染2-3个梯度孔。10，30，50.根据感染效果再调整。

yeshch

回复 liuyasi2008 的帖子1 o) [" E* N$ u' M* m
, h* G# T7 X9 ?" E! K/ k! ?
Thanks♪(･ω･)ﾉ时间紧任务重没有时间预实验了

yeshch

病毒倒是感染上了，也能看到GFP，但是细胞基本不扩增，传代之后也长不起来怎么回事啊（未感染的对照组长得很好）？有没有做过的前辈传授一下经验啊？感染前后的传代密度，培养基什么的有什么特殊要求吗？

ielisa

和我当时的实验有点像啊，也是细胞不长，还有挂掉的~~~