悬浮培养的神经干细胞如何传代及制备以临床应用？？急！！

luoye1986

悬浮培养的神经干细胞如何传代，和为了临床应用而如何制备？需具体步骤。谢谢！急用！！！

norther817

2种方法：2 i6 X7 T6 O# ^6 I! _9 r; |7 R/ z
1.化学消化：胰酶消化2-3分钟（时间尽量短），轻轻吹打20-30下，可达到单细胞悬液效果。% l7 Q4 Y5 r0 c/ G
2.机械法：细胞滤网，根据球大小，可以选择100um、40um滤网，滤过机械分割后，轻轻吹打至单悬。2 Y# d" n( d* ]  t1 j+ w9 @- f% ^5 b5 b5 w
以上2种，我们都用过，都是有效的。

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" J' |, {; s' X1 d7 G, e8 U" v: j

6 ]5 Q3 O! ^6 X2 V, dFor passage, the primary spheres were collected in sterile tubes,& [" ]( Y- F1 v- j4 v; n% q8 }
incubated for 45–60 min at 37 ◦C in 250mL undiluted TrypLETM+ I$ r# {+ U& h* w3 }8 N
Express solution (Gibco Invitrogen) per 6mL culture-derived pellet,
" P! U9 @2 ]1 g7 I. y+ i' l, nand dissociated gently with a 26G steel syringe
% W) W: V" V) P: S9 b7 ^这是猪的NSC.我们直接用枪吹打。40次左右就可以了。