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本帖最后由 阿秀哥 于 2018-11-28 14:31 编辑
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处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!
' E9 k: ?% w+ ?1 O1).将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。0 |; r/ I+ U7 ^. U+ w
2).继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。9 ~: v$ h, i) U' L
3).继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。' N0 O, w- @$ G- i
4).重复步骤3再洗。% P9 G& D# M: O4 i
5).重复步骤3再洗。" S5 ^3 \9 O( Z6 _" g
6).加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
8 J. v) ]# g' o7).加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
# d& E% G8 E( @1 h8).再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。
, ]1 e3 C8 k3 I9).加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。
" f" r8 B3 `+ M/ w- ~$ j+ h10).24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗.
! y$ u/ H1 S: Y A" {11).24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。0 p' e- j* T& T% [& G/ W
以上是对于细菌污染(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌);若为霉菌或者真菌污染,加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。其它操作同。
' P2 r1 s! _& Y; r8 ^2 z/ u希望对你有用。 |
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