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本帖最后由 阿秀哥 于 2018-11-28 14:31 编辑 ! i& ^1 R( X1 w j1 V; B* e0 c
, A4 q" @. o Q3 N; I! f8 y8 D处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!
e8 V; D8 h9 E: _, V8 a, u" h L0 w1).将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。4 j2 M# S# f) J& T1 E. R
2).继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。
- y# B$ v* x6 ?% t5 q, T; R" g3).继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。; ^2 s- ^ s) y5 S a# B
4).重复步骤3再洗。
" f9 D$ s2 f2 v! l5).重复步骤3再洗。/ L* y( a7 @, H' X: `
6).加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
6 r6 ?3 R/ P) Y% l+ J0 M* a5 q- i7).加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
; F. @/ K: |' _5 G, K. L. G* z' T8).再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。
2 N* ?; {; F' R2 A- g3 c9).加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。2 k8 ]0 {2 U6 c; D# j. k% I
10).24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗.
3 C/ H7 ~! O/ [# R/ Q! ~" Q11).24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。
D2 ~# d/ b/ j7 A$ H0 G) S* D 以上是对于细菌污染(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌);若为霉菌或者真菌污染,加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。其它操作同。0 B. A7 B6 m# C
希望对你有用。 |
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