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本帖最后由 阿秀哥 于 2018-11-28 14:31 编辑 & ~+ [$ [1 v' g0 Z1 d
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处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!, A6 T) O/ S0 v7 n
1).将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。
( o7 I& a, o8 G& s2).继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。" z: J; x: }1 C5 ^+ @
3).继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。. T) [9 W& X1 d6 k4 J7 L
4).重复步骤3再洗。# N. j% F4 \- I f/ w
5).重复步骤3再洗。7 C; b. P+ T7 |
6).加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。! x- |! H$ |' e/ J) b
7).加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
9 {9 X: f" @8 V u( j8).再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。: x0 j/ r8 I- z5 ?# z( N+ q$ R8 b# j
9).加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。
& z' {% n( M, Q& Z# ^% E' k' N1 x10).24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗.
9 `1 |+ z4 B2 B7 E/ B& `# d11).24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。
2 g# i" M1 {" G9 y 以上是对于细菌污染(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌);若为霉菌或者真菌污染,加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。其它操作同。
; U4 P9 j+ N( I# j, h希望对你有用。 |
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