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- 积分
- 201
- 威望
- 201
- 包包
- 139
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我也是在这里请教了前辈以后做出来的。因为自己也是初学者，所以只能附上比较粗略的步骤。有些地方也值得探讨。
8 s# \* }+ I7 {+ b7 K4 O- _" }兔（耳背）外周血干细胞
; f& m' h, x- V. N% U4 O7 G1、取血前3天分两次注入substanceP9 d% N. P1 W# A& h" s
2、一只兔取血10ML，立刻实验。% R/ @" {: g4 }
3、我们用的是Histopaque+—1077，与血液的体积比是1:1，血液在上，注意加入时尽量不要让其相融。0 F' v: b1 w% A `5 Q5 z+ A" K# t5 k
4、400xg 30min RT% F# E8 L. X) ^7 [% c
5、用pasteur pipet小心的取膜（约厚0.5cm），注意到新的tube中。
9 U- i7 W: G5 j/ h* G6.加入10ml1XPBS，离心，250xg 10min。弃上清。
, U X" N$ T% o1 A$ E7.在悬浮细胞，用5ml 1XPBS，离心，250xg 10min。弃上清（重复一次）& n* R, B) y2 b, i% ^5 D
8.加入0.5ml 1XPBS轻轻吹打，转移到培养皿中，加入1.5mlDMEM(10%pbs 1%p/s)6 J6 [+ C7 j# e
大约要一段时间以后才能观察到。每三天换液一次。暂不传代。
; t/ i; X' f. U) o
1 e& O* i: R( X脂肪干细胞
$ c8 ^1 K3 E0 h4 `取人体脂肪，经处理去除麻醉剂等物质
" O3 {+ S4 _; U& i, E1.配制collagense浓度为2mg/ml,1XPBS配制。与脂肪等体积混合6 w& H" x9 n. c8 @* ~. I
2.37℃，shaking，30分钟9 k& _1 _& r. Z" F
3.过滤后，加入等体积DMED（10%PBS）。离心1800bpm 5min.弃上清( _" ^) `2 k. e, Z$ H
4.加入3mlDMEM,离心,3次
# O l: m( C0 x$ d4 i0 v. N5.0.5ml 1XPBS混合，1.5mlDMED （6well）. v' J5 |* i6 A2 Z8 F1 ]: a$ u
6 M$ J+ L/ {( {. r7 r/ a7 Y
荧光实验方法如上，蓝色显影的荧光剂，加了抗体以后会用绿色的。荧光显微镜是奥林巴斯X71
; U6 u: C: Y2 t! ^7 g V- Z; U7 M( }' d8 V F
还有不足请指教（加一句，个人觉得第1张和第四张很像阿凡达里面精灵树的感觉。。。。。。O(∩_∩)O~） |
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发表于 2010-4-22 19:16
发表于 2010-4-23 09:36
