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- 积分
- 201
- 威望
- 201
- 包包
- 139
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我也是在这里请教了前辈以后做出来的。因为自己也是初学者，所以只能附上比较粗略的步骤。有些地方也值得探讨。; `) u$ ^; D8 y# i' O4 h
兔（耳背）外周血干细胞, k c" m1 E( K& j# D& H
1、取血前3天分两次注入substanceP& E/ y' }( m: C J
2、一只兔取血10ML，立刻实验。
5 x, L: i- \7 }3 g0 I3、我们用的是Histopaque+—1077，与血液的体积比是1:1，血液在上，注意加入时尽量不要让其相融。
5 J z# J0 J6 F, [4 v9 o2 v7 m4、400xg 30min RT9 Z' D9 C/ O( \# m2 z
5、用pasteur pipet小心的取膜（约厚0.5cm），注意到新的tube中。7 V0 ^$ N, _: D
6.加入10ml1XPBS，离心，250xg 10min。弃上清。% N M: g1 r, M- w/ R0 L7 O
7.在悬浮细胞，用5ml 1XPBS，离心，250xg 10min。弃上清（重复一次）# ~6 A+ H$ Y0 m9 i- u
8.加入0.5ml 1XPBS轻轻吹打，转移到培养皿中，加入1.5mlDMEM(10%pbs 1%p/s)
# I/ ~) w% W3 `5 B, r大约要一段时间以后才能观察到。每三天换液一次。暂不传代。
: x" S1 O% H$ B8 F/ }
3 W7 n0 z6 s5 l) H6 c) H脂肪干细胞
8 w% Z- F8 Z/ E取人体脂肪，经处理去除麻醉剂等物质
' @' Z* M; G$ b! c4 X6 n1 Z/ y1 x1.配制collagense浓度为2mg/ml,1XPBS配制。与脂肪等体积混合 l4 r5 K5 ~0 W
2.37℃，shaking，30分钟
8 a: G9 n/ `! f3 m' J2 h5 l3.过滤后，加入等体积DMED（10%PBS）。离心1800bpm 5min.弃上清
- c/ T8 ~7 `( k6 ^$ c. H, E4.加入3mlDMEM,离心,3次& [# k4 ]' ^2 |) a
5.0.5ml 1XPBS混合，1.5mlDMED （6well）+ e0 Y7 t+ }4 S# _; a
. E5 o* k9 F4 Q! c* |
荧光实验方法如上，蓝色显影的荧光剂，加了抗体以后会用绿色的。荧光显微镜是奥林巴斯X71
8 P5 H' _8 U! l8 Z% Y5 K; M$ C' O; @; D A3 Y% e
还有不足请指教（加一句，个人觉得第1张和第四张很像阿凡达里面精灵树的感觉。。。。。。O(∩_∩)O~） |
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发表于 2010-4-22 19:16
发表于 2010-4-23 09:36
