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我也是在这里请教了前辈以后做出来的。因为自己也是初学者，所以只能附上比较粗略的步骤。有些地方也值得探讨。5 t# x; n& S0 x2 ^- ^" h
兔（耳背）外周血干细胞
$ Q/ _% }7 Q9 ?1、取血前3天分两次注入substanceP; b8 z* o7 S) t5 [
2、一只兔取血10ML，立刻实验。- e9 o- ?3 H( }. a' X
3、我们用的是Histopaque+—1077，与血液的体积比是1:1，血液在上，注意加入时尽量不要让其相融。. e, V1 H2 T5 @) x! a2 X2 z
4、400xg 30min RT
! x$ K% _0 ]5 y, }- I& o5、用pasteur pipet小心的取膜（约厚0.5cm），注意到新的tube中。
! J1 E) u$ T, K4 @6 G( B6.加入10ml1XPBS，离心，250xg 10min。弃上清。1 S, M" h) s( F2 w0 h4 o% f9 m
7.在悬浮细胞，用5ml 1XPBS，离心，250xg 10min。弃上清（重复一次）4 E8 J o5 ] S" I
8.加入0.5ml 1XPBS轻轻吹打，转移到培养皿中，加入1.5mlDMEM(10%pbs 1%p/s)6 p2 X$ T7 Q+ L; `0 u- G
大约要一段时间以后才能观察到。每三天换液一次。暂不传代。+ Q X' C4 q! Z; S$ }
) B4 J. |, M/ W' ]/ }- y# R- ~
脂肪干细胞
o5 B& k& H) n9 \/ j" Z+ P: O取人体脂肪，经处理去除麻醉剂等物质! b4 p! u- i' e O! c
1.配制collagense浓度为2mg/ml,1XPBS配制。与脂肪等体积混合. a* t2 M4 h, I# }, f: }1 `
2.37℃，shaking，30分钟
5 m$ |2 \; b3 E* I3.过滤后，加入等体积DMED（10%PBS）。离心1800bpm 5min.弃上清
& O+ _* H2 i2 D% |6 l% p! e4.加入3mlDMEM,离心,3次
{; u0 G1 A% {8 P, D6 @! I5.0.5ml 1XPBS混合，1.5mlDMED （6well）5 Y9 X" k' x8 ~( Y
( i8 Y) D/ P, f荧光实验方法如上，蓝色显影的荧光剂，加了抗体以后会用绿色的。荧光显微镜是奥林巴斯X711 E( e) o4 F [9 B. J. v2 }
4 X- }* G' M+ g s还有不足请指教（加一句，个人觉得第1张和第四张很像阿凡达里面精灵树的感觉。。。。。。O(∩_∩)O~） |
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发表于 2010-4-22 19:16
发表于 2010-4-23 09:36
