|
- 积分
- 201
- 威望
- 201
- 包包
- 139
|
我也是在这里请教了前辈以后做出来的。因为自己也是初学者，所以只能附上比较粗略的步骤。有些地方也值得探讨。
& J# w5 j, f/ k. Q兔（耳背）外周血干细胞2 m0 I) A7 N! G7 l6 |4 i
1、取血前3天分两次注入substanceP; `/ J5 w: Q6 p
2、一只兔取血10ML，立刻实验。
9 h/ V ^+ K# }- R) w7 ^3、我们用的是Histopaque+—1077，与血液的体积比是1:1，血液在上，注意加入时尽量不要让其相融。6 w) q8 t" K; [; C
4、400xg 30min RT
, t) \0 y" K$ r! l5、用pasteur pipet小心的取膜（约厚0.5cm），注意到新的tube中。$ J% c& G v4 Y6 c9 c
6.加入10ml1XPBS，离心，250xg 10min。弃上清。4 _6 Y# v, j8 m) L7 g9 q
7.在悬浮细胞，用5ml 1XPBS，离心，250xg 10min。弃上清（重复一次）
2 M) h, Y2 w& p' N8.加入0.5ml 1XPBS轻轻吹打，转移到培养皿中，加入1.5mlDMEM(10%pbs 1%p/s)& w# y2 N4 g1 D; \! j9 `' _
大约要一段时间以后才能观察到。每三天换液一次。暂不传代。
& v3 Z7 l1 @) x6 q5 X6 L1 w+ T$ O9 l, j) f
脂肪干细胞' r' X% G" K" o# Z
取人体脂肪，经处理去除麻醉剂等物质, _+ }+ e* B& H5 t1 g% X
1.配制collagense浓度为2mg/ml,1XPBS配制。与脂肪等体积混合/ f5 c7 H* T: ^) {
2.37℃，shaking，30分钟+ I8 _$ ?' G* U- X$ a
3.过滤后，加入等体积DMED（10%PBS）。离心1800bpm 5min.弃上清
) g' ~8 ~/ Q! V4.加入3mlDMEM,离心,3次
) p$ R5 y# B& u, S5.0.5ml 1XPBS混合，1.5mlDMED （6well）, V8 _% H& U( |* M
+ z4 `0 |1 W6 _' B! Q
荧光实验方法如上，蓝色显影的荧光剂，加了抗体以后会用绿色的。荧光显微镜是奥林巴斯X71
6 w5 Y C: L8 h; r0 W) y
5 W- j4 `# [6 d3 `! [% ]. k还有不足请指教（加一句，个人觉得第1张和第四张很像阿凡达里面精灵树的感觉。。。。。。O(∩_∩)O~） |
-
总评分: 威望 + 20
包包 + 30
查看全部评分
|
发表于 2010-4-22 19:16
