关于克隆效率问题

songzxj

各位研究员：
  X, m  ]$ N! b( B* B    本人最近一直在思考一个问题，那就是克隆的效率还能提多高？最终能不能达到体外受精的效率呢？请各位研究员发表您的见解。

songzxj

先抛砖引玉。
" z0 b/ J% T5 z* T1 {' p/ V2 g# D; p' m我觉得克隆的效率可能不会像IPS诱导那样，随着其研究的推进而不断得到提高。3 o3 Y% n! X; q1 ~5 D
因为IPS在诱导过程中可以有针对性的、特异的改变培养条件或者更换供体细胞等手段来提高效率。而克隆是卵胞质随机的reprogram体细胞，重编程的是否全面，是否每一次都一致，很难讲。卵子reprogram过程的相关因子研究并不如IPS那样清楚。没有办法做到像IPS那样有针对性的添加相关的因子。自从1997年多利诞生到现在，世界各国克隆专家一致在致力于克隆效率改进，但是效果甚微，因此我觉得克隆的效率不会得到显著的提高。
5 H' F, O5 S8 W) k一点拙见，请大家指正。

张也行

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& K# `5 D: Y0 v
1 V: ^) s& l9 J' x首先核移植的效率比正常用四个因子诱导的效率要高一些！并且核移植重编程得到的ES细胞要比iPS细胞更接近ES细胞。. k+ m$ g$ [$ }4 x: P* h' b) z
iPS重编程和核移植都可以看成是随机的。iPS重编程因子发现也是源于卵子具有重编程能力，并从中发现了四个因子。2 ~0 E, L4 J# ]* {2 a
确实iPS更好容易manipulation，但是四个因子重编程得到的iPS常常面临着不完全重编程的问题，影响iPS的分化潜能。再说核移植得到的囊胚也不是不能认为干涉的啊，在iPS中有效的一些小分子有一些，比如影响染色体结构的小分子也能促进核移植的效率的。
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9 ^( i1 W' j- _/ U9 B1 Y: c0 Z$ `4 ]

douhw

因为是HMC，体系都还不错，囊胚率也高，第四周受体怀孕检测有时达100%，而且转基因有时更好，但问题是怀孕中期有吸收的，也有中后期死亡的，畸形的，还有预产期孕体给受体信号不足而产道不开滞产死亡的，产后哺乳期也有死亡。总之，要解决整个体系问题，如楼上所说，或许可在囊胚阶段加以干涉。

songzxj

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8 K8 t% Z) o8 ~4 D; }1 k- e6 J. }0 Z+ h9 z; [" M
谢谢！
' g8 t6 ^$ W2 W6 K6 n7 N非常赞同你的一些观点，核移植效率要比IPS的效率要高，且NTES比IPS更接近ES细胞（这是去年一nature paper求证过的）。
. k; z' U8 w1 r5 s
7 M2 N# ~8 z* i% q& K3 X8 s我们知道四因子发现源于卵子的重编程（或者细胞融合过程的重编程，我不确定），但是这些发现却没有应用于克隆效率的改进！你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。
( f6 C) C) O% a- C" _
6 h5 i3 l* y# v' L. I所以我想IPS中有效的因子对于提高效率可能并不起作用。

songzxj

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& ?- _& U- V" V, H0 z$ B" W2 _2 m% S1 |% `! s3 j: A7 m
不好意思，我其实是不看好HMC的，可能是偏见吧。不过它在牛的应用上真的很成功。: F8 X1 |( M! ]5 _5 Y+ g  h! u
( A5 {. r0 ~' x& W# C0 F3 v
请问你做的是什么动物？第四周检测怀孕率，猪吗？
; E; V+ g* C$ B: G& e: I! N8 B0 V2 p5 c! U
怀孕中期吸收的现象是很多克隆动物共有的问题了，这个追根溯源应该还是重编程不完全造成的，所以说体外囊胚率高并不一定胚胎质量好，它只是其中一个参数。* R- l- h* `3 \( r2 U8 g9 v" e
, q, g$ ?; Y* u
解决重编程问题的途径不外乎那么几个时间点：供体细胞、早期胚胎和囊胚期。但是前两个时期算是预防的话，那囊胚期只能算是补救治疗了，因为那个时候胚胎已经由多潜能细胞期重新进入分化过程。

张也行

回复 songzxj 的帖子; U4 H; n$ Y; t3 g) Y' W

  q) f, A) V6 Y% k1 N$ B; W+ X+ N9 q8 c* x7 q; N7 H2 \

你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。

1 @; s' o& L/ D) q6 `1 \
我觉得也不是。在成熟的MII期的卵子中是有这些因子。虽然Yamanaka曾在文献中说iPS灵感来自核移植，但是iPS最初是从ES特异性的基因库中筛选出来的，分离出来的是因子都是与多能性相关的关键因子。但是，我觉得我们不应该吧核移植得到的一个完整的胚胎，也就是说核移植获得的是全能型的细胞（totipotent），从发育的囊胚中分离出了ES细胞。而四个因子诱导的iPS细胞是多能性的（pluripotent）。核移植获得的融合胚胎能生长到囊胚阶段，从中分离出来的ES细胞（NT-ES）与正常fertilize，分离出来的ES更接近也就容易接受了。. w8 R7 X6 q. @6 \- [
所以，iPS应该更多的向核移植“学习”，比如周琪和高绍荣都试过分析成熟卵子中的蛋白质以期望获得更多，更关键的重编程因子。

douhw

回复 songzxj 的帖子. n6 w! r0 i( [" y8 Q. ^
4 k! B- \; _  i
HMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。
! ]' y: r  y1 \8 n# J$ [" @0 L$ o8 x. P7 d2 a7 A
我觉着，重编程最重要的处理阶段是在融合前后，因为在体细胞进入卵胞质、融合后，重编程便开始了。

ambassador

$ H% {; m, R- {' ~& W: k8 b7 t* `

douhw 发表于 2011-1-11 09:55 6 w7 S3 l3 H3 x! v+ z0 k- I- W
回复 songzxj 的帖子
/ m( {6 A/ K6 K2 |  |; {+ n. W6 W$ h: Z5 D2 s" S* @; o$ [
HMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。

4 W4 a* A9 t/ k8 A' e5 M  G' c) j0 W, l
我个人觉得不足之处是需要提供大量的卵母细胞（这个在大型猪场可以提供，也就不是问题了），其他的不足之处，还请多指教？. A% }  ^; P: O

, k* S) Q3 {" u; |, j5 A还有在重编程最重要的处理阶段，融合前是只对受体细胞（去核的卵母细胞）进行处理？融合后的体外成熟除了常规的方法外是如何处理？

douhw

回复 ambassador 的帖子. \$ F) G$ }  |" s3 M, L

8 M% [% d* \7 H# I其实我认为，透明带的缺失、以及如在制作嵌合体方面等都存在与显微注射相比较的不足。3 Q' C7 i: B8 Y1 W3 o2 z+ \

7 L0 O8 m8 ]3 p5 t# c: n3 l4 p而且关于重合编程，我认为融合前对卵母细胞的处理即去核阶段，融合后对重构胚的处理是最重要的处理阶段，以为此时供体细胞与卵胞质融合而编程开启。但是，尚未付诸实施。