关于克隆效率问题

songzxj

各位研究员：; H6 v# f# D1 `( i7 I# {% _
    本人最近一直在思考一个问题，那就是克隆的效率还能提多高？最终能不能达到体外受精的效率呢？请各位研究员发表您的见解。

songzxj

先抛砖引玉。& B+ G! o1 r' x* I- W
我觉得克隆的效率可能不会像IPS诱导那样，随着其研究的推进而不断得到提高。& t& e+ S4 ]  v- f
因为IPS在诱导过程中可以有针对性的、特异的改变培养条件或者更换供体细胞等手段来提高效率。而克隆是卵胞质随机的reprogram体细胞，重编程的是否全面，是否每一次都一致，很难讲。卵子reprogram过程的相关因子研究并不如IPS那样清楚。没有办法做到像IPS那样有针对性的添加相关的因子。自从1997年多利诞生到现在，世界各国克隆专家一致在致力于克隆效率改进，但是效果甚微，因此我觉得克隆的效率不会得到显著的提高。; }- x) y# K, g, V# }$ a
一点拙见，请大家指正。

张也行

回复 songzxj 的帖子) ]; X& W' f2 U2 M( |: g. [
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首先核移植的效率比正常用四个因子诱导的效率要高一些！并且核移植重编程得到的ES细胞要比iPS细胞更接近ES细胞。
; R" `7 a: Y8 @' v5 FiPS重编程和核移植都可以看成是随机的。iPS重编程因子发现也是源于卵子具有重编程能力，并从中发现了四个因子。" d, a1 [( B- [8 z
确实iPS更好容易manipulation，但是四个因子重编程得到的iPS常常面临着不完全重编程的问题，影响iPS的分化潜能。再说核移植得到的囊胚也不是不能认为干涉的啊，在iPS中有效的一些小分子有一些，比如影响染色体结构的小分子也能促进核移植的效率的。" R5 p: B9 i8 O* O8 A

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douhw

因为是HMC，体系都还不错，囊胚率也高，第四周受体怀孕检测有时达100%，而且转基因有时更好，但问题是怀孕中期有吸收的，也有中后期死亡的，畸形的，还有预产期孕体给受体信号不足而产道不开滞产死亡的，产后哺乳期也有死亡。总之，要解决整个体系问题，如楼上所说，或许可在囊胚阶段加以干涉。

songzxj

回复 张也行 的帖子  S! p6 l3 z9 Y0 H
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谢谢！
" {8 j# y/ G& `, C; @) j/ q非常赞同你的一些观点，核移植效率要比IPS的效率要高，且NTES比IPS更接近ES细胞（这是去年一nature paper求证过的）。0 b7 K* R2 E4 B0 t' D' A

3 G: {, Q' {) {( A我们知道四因子发现源于卵子的重编程（或者细胞融合过程的重编程，我不确定），但是这些发现却没有应用于克隆效率的改进！你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。3 J5 W8 @8 i8 x  A5 @( g

) ~$ K- F( B1 c9 v" A3 B5 x6 g" Y# y所以我想IPS中有效的因子对于提高效率可能并不起作用。

songzxj

回复 douhw 的帖子0 L& L! ^  K6 K$ }  P( E

5 |& s, Z& Y% U# C' E5 D不好意思，我其实是不看好HMC的，可能是偏见吧。不过它在牛的应用上真的很成功。
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0 h% O. q; E7 ~7 x9 ^2 e请问你做的是什么动物？第四周检测怀孕率，猪吗？2 I) i* u" o7 n9 H+ n
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怀孕中期吸收的现象是很多克隆动物共有的问题了，这个追根溯源应该还是重编程不完全造成的，所以说体外囊胚率高并不一定胚胎质量好，它只是其中一个参数。
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/ a' ^1 L8 _4 U) _9 J7 u# F' H解决重编程问题的途径不外乎那么几个时间点：供体细胞、早期胚胎和囊胚期。但是前两个时期算是预防的话，那囊胚期只能算是补救治疗了，因为那个时候胚胎已经由多潜能细胞期重新进入分化过程。

张也行

回复 songzxj 的帖子$ I0 R( Y( Y# A1 F

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你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。

8 J* `% P! W2 r, k% C1 Q, N9 y我觉得也不是。在成熟的MII期的卵子中是有这些因子。虽然Yamanaka曾在文献中说iPS灵感来自核移植，但是iPS最初是从ES特异性的基因库中筛选出来的，分离出来的是因子都是与多能性相关的关键因子。但是，我觉得我们不应该吧核移植得到的一个完整的胚胎，也就是说核移植获得的是全能型的细胞（totipotent），从发育的囊胚中分离出了ES细胞。而四个因子诱导的iPS细胞是多能性的（pluripotent）。核移植获得的融合胚胎能生长到囊胚阶段，从中分离出来的ES细胞（NT-ES）与正常fertilize，分离出来的ES更接近也就容易接受了。
* K, T8 z- [$ V, c: y6 W$ u所以，iPS应该更多的向核移植“学习”，比如周琪和高绍荣都试过分析成熟卵子中的蛋白质以期望获得更多，更关键的重编程因子。

douhw

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( T. d3 s* F- @2 o4 U; t  E$ uHMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。
) d: S( e( b, F% I  Y, A8 M2 ?; S
7 A* u& r, g0 F7 E( b9 {1 x" w$ l我觉着，重编程最重要的处理阶段是在融合前后，因为在体细胞进入卵胞质、融合后，重编程便开始了。

ambassador

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douhw 发表于 2011-1-11 09:55 1 l- K2 L! _- `& ^1 y
回复 songzxj 的帖子: Q! G3 t& T( ~
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HMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。

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我个人觉得不足之处是需要提供大量的卵母细胞（这个在大型猪场可以提供，也就不是问题了），其他的不足之处，还请多指教？
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! b; R; F3 P5 o; H$ F, \还有在重编程最重要的处理阶段，融合前是只对受体细胞（去核的卵母细胞）进行处理？融合后的体外成熟除了常规的方法外是如何处理？

douhw

回复 ambassador 的帖子7 e' Z* R! v  _* b

( C9 n" `! o- }其实我认为，透明带的缺失、以及如在制作嵌合体方面等都存在与显微注射相比较的不足。
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而且关于重合编程，我认为融合前对卵母细胞的处理即去核阶段，融合后对重构胚的处理是最重要的处理阶段，以为此时供体细胞与卵胞质融合而编程开启。但是，尚未付诸实施。