猪胚胎操作各种液体配方

HMC

猪胚胎操作各种液体配方：# I4 K, h* t! W
（1）洗卵液：改良TL-Hepes-PVA液，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/瓶分装并用封口膜封口保存于4°C备用，使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。
$ Y$ M( S; m% P  c; m2 b+ r, ~（2）卵母细胞体外成熟培养液：改良TCM-199液（Gibco, GrandIsIand, NY, USA）,其中添加3.05 mM D-葡萄糖、0.91 mM丙铜酸钠、 75 μg/mL青霉素、50 μg/mL链霉素，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为储存液A；储存液A添加0.57 mM半胱氨酸、10 ng/mL EGF，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C即为储存液B；使用的前天晚上储存液B添加10% pFF、10 μg/mL FSH、10 μg/mL LH即为工作液A，第二天晚上储存液B添加10% pFF即为工作液B。' N  n$ {/ o1 ~  r. V) t- ?
（3）胚胎培养液：NCSU-23，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为储存液；储存液添加0.4% BSA，溶解后用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为工作液，使用的前天晚上放入39°C二氧化碳培养箱预平衡。
) Q% r6 }' w1 V8 _  `6 p! r（4）6-DMAP液：NCSU-23 + 0.4% BSA + 2mM 6-DMAP，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为工作液，使用的前天晚上放入39°C二氧化碳培养箱预平衡。  f( F* H$ j0 u8 }0 O/ o
（5） 操作液：洗卵液 + 10% FBS，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装保存于 - 4°C备用即为工作液, 使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。
1 `" w" Z' s5 H# L: }（6） 融合/激活液的配制：0.25 M甘露醇 + 0.1 mM/mL MgSO4 + 0.1 mM/mL CaCl2 + 0.5 mM Hepes + 0.01 % PVA，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10 mL/管分装保存于 - 20°C或 - 4°C备用，使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。
( x5 [* o% _; p" d. d5 v

ambassador

改良TL-Hepes-PVA液，这个有配方吗？？？

POPOLD

再好加上hepes  缓冲作用 。  pva 和bsa作用差不多 ，要卵沉下来  pva好些

mayuan3012

融合液不加hepes能不能行？

461650833

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! g/ c9 Q) d5 @+ E4 V: A# t/ e/ N# E4 w, S& e
我们一直在用啊 也没用最新的  

HMC

回复 461650833 的帖子: P, \3 f& u0 @: U! q3 t( Y7 H
/ p9 s! A+ K  O/ q/ t7 G- _2 e' U
这个太久了，有最新的吗？

461650833

想了解猪胚胎核移植的 可以看看这篇文献 # \. D$ H4 A8 J! ?3 b) a' M
这个是赖良学的  

461650833

我们实验室用的融合液没有放PVA啊  
4 h* b& l0 x1 c6 [0.3 M mannitol, 1.0 mM CaCl-22H2O 0.1 mM MgCl2-6H2O and 0.5 mMHepes.  这是我们融合液的配方。; R/ B+ o/ T8 ?2 v2 q9 k. {

HMC

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8 C2 v6 i/ ]( }2 t8 W5 Y6 B. w0 V' F' K+ l8 e- ]! U
呵呵，无论单用电激活还是化学激活都不是太理想，如果将两者结合使用也就是说电化联合激活效果会更佳

fantafiction

请问猪卵电激活和化学激活（6dmap）那个更好/？