猪胚胎操作各种液体配方

HMC

猪胚胎操作各种液体配方：
* @1 D! @! v, W( O$ Z1 u9 M（1）洗卵液：改良TL-Hepes-PVA液，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/瓶分装并用封口膜封口保存于4°C备用，使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。
" m& z, A: G3 R4 ~0 l（2）卵母细胞体外成熟培养液：改良TCM-199液（Gibco, GrandIsIand, NY, USA）,其中添加3.05 mM D-葡萄糖、0.91 mM丙铜酸钠、 75 μg/mL青霉素、50 μg/mL链霉素，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为储存液A；储存液A添加0.57 mM半胱氨酸、10 ng/mL EGF，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C即为储存液B；使用的前天晚上储存液B添加10% pFF、10 μg/mL FSH、10 μg/mL LH即为工作液A，第二天晚上储存液B添加10% pFF即为工作液B。) W1 L2 u' N- g+ [4 p
（3）胚胎培养液：NCSU-23，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为储存液；储存液添加0.4% BSA，溶解后用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为工作液，使用的前天晚上放入39°C二氧化碳培养箱预平衡。! d  u2 ]& z# ]& I( s6 E
（4）6-DMAP液：NCSU-23 + 0.4% BSA + 2mM 6-DMAP，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为工作液，使用的前天晚上放入39°C二氧化碳培养箱预平衡。* q( y" c* U0 d4 K" l) e" T4 O
（5） 操作液：洗卵液 + 10% FBS，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装保存于 - 4°C备用即为工作液, 使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。
9 d8 I. ^0 u5 E* @, k+ L（6） 融合/激活液的配制：0.25 M甘露醇 + 0.1 mM/mL MgSO4 + 0.1 mM/mL CaCl2 + 0.5 mM Hepes + 0.01 % PVA，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10 mL/管分装保存于 - 20°C或 - 4°C备用，使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。7 u" z7 Y! S) H- z

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这些都是好东西，如果大家还需要进一步了解，可以尽管提问

cony

如何解决精子活力低问题？还有如何提高囊胚比例？

fantafiction

请问猪卵电激活和化学激活（6dmap）那个更好/？

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5 P+ A9 K7 Q: m) b3 c& g( G4 O) x2 m6 Y3 |
呵呵，无论单用电激活还是化学激活都不是太理想，如果将两者结合使用也就是说电化联合激活效果会更佳

461650833

我们实验室用的融合液没有放PVA啊  
& u; L7 C, l( C9 ~/ v: j0.3 M mannitol, 1.0 mM CaCl-22H2O 0.1 mM MgCl2-6H2O and 0.5 mMHepes.  这是我们融合液的配方。
7 d1 T$ y! n$ J6 G/ u

461650833

想了解猪胚胎核移植的 可以看看这篇文献
/ ?2 E6 o6 c  ?' z7 K# E这个是赖良学的  

HMC

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1 a3 K8 L4 i( [  Q2 J; ~
9 K* }; d1 y3 ]% O, @这个太久了，有最新的吗？

461650833

回复 HMC 的帖子" y" K8 n6 x0 ]5 V8 v8 ^$ d

' p3 j! G& }; F. g我们一直在用啊 也没用最新的  

mayuan3012

融合液不加hepes能不能行？