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猪胚胎操作各种液体配方 [复制链接]

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楼主
发表于 2011-4-30 19:41 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
猪胚胎操作各种液体配方:9 c% [6 J2 C" D
(1)洗卵液:改良TL-Hepes-PVA液,用0.22 μm一次性滤器过滤除菌,按40 mL/瓶分装并用封口膜封口保存于4°C备用,使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。
3 I7 @; P9 n! E(2)卵母细胞体外成熟培养液:改良TCM-199液(Gibco, GrandIsIand, NY, USA),其中添加3.05 mM D-葡萄糖、0.91 mM丙铜酸钠、 75 μg/mL青霉素、50 μg/mL链霉素,用0.22 μm一次性滤器过滤除菌,按40 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为储存液A;储存液A添加0.57 mM半胱氨酸、10 ng/mL EGF,用0.22 μm一次性滤器过滤除菌,按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C即为储存液B;使用的前天晚上储存液B添加10% pFF、10 μg/mL FSH、10 μg/mL LH即为工作液A,第二天晚上储存液B添加10% pFF即为工作液B。
. z; [) N' {% F' B. v(3)胚胎培养液:NCSU-23,用0.22 μm一次性滤器过滤除菌,按40 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为储存液;储存液添加0.4% BSA,溶解后用0.22 μm一次性滤器过滤除菌,按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为工作液,使用的前天晚上放入39°C二氧化碳培养箱预平衡。
! [2 c4 i; |' y" U(4)6-DMAP液:NCSU-23 + 0.4% BSA + 2mM 6-DMAP,用0.22 μm一次性滤器过滤除菌,按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为工作液,使用的前天晚上放入39°C二氧化碳培养箱预平衡。
/ f) t( s2 B( R' ]9 j(5) 操作液:洗卵液 + 10% FBS,用0.22 μm一次性滤器过滤除菌,按10-12 mL/管分装保存于 - 4°C备用即为工作液, 使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。
( X, j1 K3 b- y0 [(6) 融合/激活液的配制:0.25 M甘露醇 + 0.1 mM/mL MgSO4 + 0.1 mM/mL CaCl2 + 0.5 mM Hepes + 0.01 % PVA,用0.22 μm一次性滤器过滤除菌,按10 mL/管分装保存于 - 20°C或 - 4°C备用,使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。& y. f7 c0 g" k) P" Y
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沙发
发表于 2011-4-30 20:30 |显示全部帖子
这些都是好东西,如果大家还需要进一步了解,可以尽管提问

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藤椅
发表于 2011-5-3 08:09 |显示全部帖子
回复 fantafiction 的帖子( N. ?9 V2 P) C  m# \/ D

: L# E) l2 S: o, {8 H呵呵,无论单用电激活还是化学激活都不是太理想,如果将两者结合使用也就是说电化联合激活效果会更佳
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板凳
发表于 2011-5-3 20:04 |显示全部帖子
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回复 461650833 的帖子7 \2 H5 Q: x" B/ w

0 U( j* ]+ X; p( S  q这个太久了,有最新的吗?
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