关于mESC传代密度与其细胞状态维持的问题

dilal

回复 7ubo 的帖子7 c. ~& Y9 \( j0 N( V: ^

1 f: @4 J! P" E: n+ D: D& [9 O5 b/ t. }& X无feeder的培养体系主要是避免了MEF细胞对后续试验及研究的干扰，而且相对来说操作比较简单。但这种培养体系很大程度上依赖于所添加的抑制因子的质量。
  j& A2 D; m2 Z( i4 _$ h无feeder培养需要添加细胞分化抑制因子，mESC公认的是白细胞抑制因子LIF，hESC是bFGF。目前关于胚胎干细胞无饲养层的培养报道已经很多了，可谓是比较成熟了。但iPS细胞的相关报道目前尚不多，公认的还是feeder培养。

almasun97184

mESC无feeder培养加足了LIF养个三代还好，久了就有分化的了，实验结果不可靠。一般还是用feeder维持，做实验之前用差速贴壁法去feeder。方法通常为全部消化下来，tip头吹打成单细胞，在明胶上贴壁一小时，feeder会在一小时内贴壁，洗掉未贴壁细胞，为较纯的mESC。
) w/ F+ P) [7 y% \) }+ [mESC较容易消化是经验之谈，没有在文献上看到过。以上的差速贴壁法其实也证明了mESC的贴壁能力更弱。
: u$ a3 @* a# c2 R' ?/ Y回7ubo：其实消化时间相差不多，用tip一吹都散了。另外也不是ESC一接触就分化，没这种说法。只是当ESC克隆开始相互接触，说明皿里的细胞量已经非常多了，培养基很容易变黄。对于这样快速生长的细胞，一天换液一次都不足以维持它们的营养，营养不够自然容易分化。" T' Y& l+ m7 H1 ~
请问dilal：我没想明白为什么mESC要用无feeder的方法培养？状态又不好，又费LIF。hESC还想得通。

ncuskliliping

非常感谢

yue44

我也是新手，刚接触mESC，多谢楼主，了解不少。

chiefcat

我也是新手喔, 很多東西還弄不清楚, 謝謝樓主~