请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

xiangchou812

细胞转染后用药物筛选一下，可以长出来克隆，不知大家怎么挑取的？1 d+ G  ~0 Z0 Q! g, N
我用过滤纸法，可能是不得法，细胞不往滤纸上粘，还在皿里。
7 K- ^6 d4 |3 ~# Z  u欢迎大家讨论，分享自己的经验。

SCNT

最好的方法就是在96孔板或48孔板进行药物筛选，这样很简单就得到单克隆了

xiangchou812

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7 G# [# D1 g$ z4 n这样用的板子会不会太多了？

SCNT

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1 n7 I& x6 d" N: d; M3 {3 l9 r; S
虽然用的板子多，但得到的单克隆是相对比较高，也非常容易消化获得单克隆的细胞啊，我们经常用这个方法的

xiangchou812

回复 SCNT 的帖子! f$ `' _# O, s+ s: N
* }; s/ T4 G- U' F* K$ E" X/ k: Y
应该比较纯，好的谢谢你的建议。
$ s3 @3 A9 O$ F/ Y另外，你们转化后接种时一般密度多少？

SCNT

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1 t6 b6 I, d! B" z. P" }! S$ ^4 F; }: K4 H
这个没有具体的要求，我们也没有计算过具体密度，也不太现实，肉眼观察，差不多就可以

SCNT

还可以在大皿上筛选，使用微量胰酶消化法收集单克隆细胞

军医

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) m0 s0 l4 Y0 @7 v# I) e1 @2 @& u  _/ s" K. E
这样筛下来，细胞活力会不会没有用96孔板筛的活力好呀，毕竟加药对细胞的活力还是有影响的，我们实验室有时单克隆就扩增不起来了。

xiangchou812

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8 w) i0 |0 K# ~1 J, ?
" b  G# e' z  Q& m4 |: t克隆扩增不起来是很正常的，毕竟体细胞在体外的扩增代数有限，所以说，筛克隆不难，但是想要筛到好的克隆就不那么容易了。

生物化学zy

我们实验室,是用自己做的克隆环(就是自己用那个口服液的小瓶的瓶环,用钳子掰下来,干热160度2h灭菌),用镊子夹着放在克隆上,刚好把克隆套上,之后不要移动克隆环,然后滴加少许胰酶消化,最后加含血清培养液终止即可.其实克隆环就是起着将克隆固定的作用.很好用的.