请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

xiangchou812

细胞转染后用药物筛选一下，可以长出来克隆，不知大家怎么挑取的？
1 P& B1 l3 f) k& N- Z1 H* E, S我用过滤纸法，可能是不得法，细胞不往滤纸上粘，还在皿里。; B+ D0 A7 K9 r- i
欢迎大家讨论，分享自己的经验。

wnavy200299

生物化学zy 发表于 2011-5-18 17:08 . P" l/ i" k; Y0 T2 N0 |) _4 }0 d
顺便说一下,wnavy200299 是我师兄,哈哈

/ Q2 t+ q  O8 I# a  M5 U! z
哈哈，共同为干细胞论坛添砖加瓦~~~

生物化学zy

顺便说一下,wnavy200299 是我师兄,哈哈

jiays

将细胞间紫外杀毒，将大皿放到显微镜上，确定克隆后，用一微升的枪吸取或挑取到96孔板中涮洗，一般都可以成功，这样不会被超净台拘泥，方便炒作

wnavy200299

不管用什么克隆环（玻璃瓶口环、大枪头粗短截断部分等），基本意思和思想是一致的。/ I$ l8 C# y+ v, ]# M# W
转染一般用6cm板，转然后（12h后）分板，一般分板比例为1:10~12（1个6cm板分到10~12个6孔板），分板时不加药，次日换液开始加筛选培养液。一般10天左右出现克隆。挑克隆至24孔板培养。ok~

yiyeqiu

我们实验室的做法是用6孔板加药物筛选，当形成稳定的克隆后，用1ml的移液枪头比较大的那一段做成环，加胰酶消化，操作和楼上的差不多了。

sheepthief

回复 生物化学zy 的帖子" p' D2 g: L/ X2 c6 c
7 P4 q% t5 {( B2 \' [  p8 x6 [
高明

xiangchou812

回复 绿雪 的帖子
7 [0 ]5 B  c, j
$ u1 G/ J0 A8 P# |$ q/ b8 Y准确点说应该是打靶的难筛，随机整合的细胞还是相对容易很多的。# J1 J" L4 ~! }0 |' d
就用96孔板，一次转上两三皿细胞，做上两次应该就能筛得到的。

xiangchou812

回复 wnavy200299 的帖子" c2 H) y* w3 h( @

* r5 U# i- _6 }6 u2 m  V" Y6 h非常感谢。这下一目了然。图片还是比文字明了啊。" S1 X+ @: J6 N5 L& Z9 m6 A
不过这种方法好像只有在克隆少的时候管用吧？不过确实是个非常好的方法。, A8 V1 `( H) B1 i# G# k
学习了。

wnavy200299

更正“长了克隆就有可能养不起来。”
# \& B# X5 S1 Z6 @" ?, Z挑了的克隆就有可能养不起来。”( J3 i, Z3 O  _

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