请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

深海寂寞鱼

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' e! O, r# g4 y$ P  to 生物化学zy：
' A8 G& T8 Q6 G0 B& X6 h
1 u! u) k/ y5 m' G  一看就知道是高手啊。顶礼膜拜ing......
" y& U6 g; ]  u, z
/ K1 R7 o: ^+ ]1 w  不知道口服液的瓶环具体指哪一部分，我有点没搞明白。再一个请问您是如何将自制的克隆环，固定在皿的底部的？& ~7 J. h: P' b$ m3 n

/ e( w7 l3 T8 g, [- w" Z   由于我通常都是用200ul枪头直接挑克隆 或者 用有限稀释法，没太用过克隆环的原因就是克隆环的固定和密封性问题。
, O) d' V: Y9 Q
: ~4 }+ F6 z$ F, b$ t; _. v  T   还希望您能指点一下。谢谢了！

xiangchou812

回复 生物化学zy 的帖子! d$ v) x1 \* l5 G$ s8 {

' s, ~1 r' {* y( t) ?& o7 n% j谢谢。很好的方法

daviddow

上面的好厉害，能不能在具体一下降解你们试验挑取克隆的方法？

生物化学zy

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) n9 V2 I/ G; ]  Y5 N+ z* W  J: j7 z$ Q. V" P) K& Y) N+ y
就是那种口服液的瓶颈的部位.拿下来之后就是一个环.挑克隆时将其轻轻的放在克隆上,一般的经验是那个大小刚好把克隆套住,放在上面就行,不要再动,之后加酶就行,整个过程不要再动克隆环,以免细胞丢失.

深海寂寞鱼

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0 f. t3 @3 r; ~" p' C  Q' p* N
7 X. a3 |! G8 e3 y% w+ X2 w" d 4 X: B) @9 E2 a( Z
     再请教一下，你说的瓶颈是指的玻璃的那部分吗？还是开口的那部分金属环？: o  X2 X5 U: A0 G6 R* A* v. k

" l7 N$ ]+ m( l  U! O: L: ~     还有你把自制的密封环放在皿里以后，怎么包装密封性？
; U" i, w3 u% N' U5 X
  ?/ l: J) G  z: w9 D2 G& D8 Y     我们一般是用一种密封胶，但是不太好用。
, ]" K0 A5 l# L! w" E2 r; s
6 m0 s; Z+ n1 |     希望您可以详细的给我讲讲。谢谢啊！

lifeida

我们一开始用10cm皿筛选，单克隆长出来了，我们用胰酶消化，但不好消化，如果两个单克隆靠的很近的话，很容易消化到周围其他克隆，后来我们就用机械法来挑克隆（就是拉根玻璃针，在体式显微镜下温柔地搓起来），效果不错，能挑到很纯的克隆。后来嫌这个10cm皿麻烦，就用48孔板，我们一般一个孔（6孔板）传到6个48孔板中，密度大概10%或更低，长到30-40%，开始加G418筛选，等长出单克隆时，加胰酶消化传代，这个方法有个缺点，48孔板有的会长出多个克隆，这样消化下来的话是多克隆而不是单克隆，因此，如果转染效率高的话，接种密度低一点，长出来的单克隆会多点。

生物化学zy

回复 深海寂寞鱼 的帖子* [3 V2 R+ L% P4 {
& l. j) _+ W4 r! I# {- G, [7 P
是玻璃的那部分.自制的一个一个环,然后全部清洗,晾干.装在小烧杯中,包好,160度2h灭菌.
* X% D. [6 D/ I, O% w9 }保存.  你挑克隆的时候可以在显微镜下用marker把克隆标出来,就是画个圆圈,标出位置,用镊子夹住克隆环,轻轻的放在那个圈上,不用密封.轻轻的加入胰酶,消化就行,就是整个过程中不要让克隆环移动就行.

xiangchou812

回复 生物化学zy 的帖子) g8 t) B' R$ y5 E, m

8 ^+ l# i* T8 M, c- ^; }: F+ i玻璃的哪部分？不会是把瓶体砸下来，只留瓶口？用的时候倒过来？这能取到那么好的么？不知你们用的是什么口服液瓶子。
9 y2 n( c3 E7 J1 I5 {/ S8 c; K4 m! w" s' a. F
欢迎大家继续讨论

军医

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4 r5 Y% B+ v8 F9 H9 w% ?很好的方法

biovictor

如果实验室有足够的经费，可以选择做一些微流芯片，高效省时省力，可以很方便的筛选所需克隆。这里有一些介绍：
, z' ~9 ?5 u" d. ]　微流控芯片技术(Microfluidics)是把生物、化学、医学分析过程的样品制备、反应、分离、检测等基本操作单元集成到一块微米尺度的芯片上， 自动完成分析全过程。由于它在生物、化学、医学等领域的巨大潜力，已经发展成为一个生物、化学、医学、流体、电子、材料、机械等学科交叉的崭新研究领域。报告介绍微流控芯片技术领域国际最新发展，结合报告人多年微流控芯片研发成果，介绍一套完整而独特的芯片制造工艺技术，以及多种不同应用的微芯片。+ i3 j* M0 Y% g, G0 L+ z, x

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