请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

深海寂寞鱼

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, P% g+ Q& y$ N  to 生物化学zy：
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: [0 [; l+ M5 _% F7 c  一看就知道是高手啊。顶礼膜拜ing......
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  不知道口服液的瓶环具体指哪一部分，我有点没搞明白。再一个请问您是如何将自制的克隆环，固定在皿的底部的？/ X8 a  {5 W3 z1 p  e! m
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   由于我通常都是用200ul枪头直接挑克隆 或者 用有限稀释法，没太用过克隆环的原因就是克隆环的固定和密封性问题。( K$ z' Q! c. R9 B4 k

: J/ s3 n8 J; w/ n  U5 F   还希望您能指点一下。谢谢了！

xiangchou812

回复 生物化学zy 的帖子" `- K" O( ?& j' w

1 J6 Z- ?0 [' A! {5 p& u6 y4 Z  D+ K谢谢。很好的方法

daviddow

上面的好厉害，能不能在具体一下降解你们试验挑取克隆的方法？

生物化学zy

回复 深海寂寞鱼 的帖子8 v4 _$ y& ^: q' m
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就是那种口服液的瓶颈的部位.拿下来之后就是一个环.挑克隆时将其轻轻的放在克隆上,一般的经验是那个大小刚好把克隆套住,放在上面就行,不要再动,之后加酶就行,整个过程不要再动克隆环,以免细胞丢失.

深海寂寞鱼

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# P" D- F" T: X3 g7 L     再请教一下，你说的瓶颈是指的玻璃的那部分吗？还是开口的那部分金属环？
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3 E  j1 Z( Y/ v3 O6 i3 x/ v     还有你把自制的密封环放在皿里以后，怎么包装密封性？
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' a9 J. o4 c0 x6 I. h3 _* Z     我们一般是用一种密封胶，但是不太好用。
) Z/ w9 o% @  y2 p0 Q1 D" c  L( x/ ]
     希望您可以详细的给我讲讲。谢谢啊！

lifeida

我们一开始用10cm皿筛选，单克隆长出来了，我们用胰酶消化，但不好消化，如果两个单克隆靠的很近的话，很容易消化到周围其他克隆，后来我们就用机械法来挑克隆（就是拉根玻璃针，在体式显微镜下温柔地搓起来），效果不错，能挑到很纯的克隆。后来嫌这个10cm皿麻烦，就用48孔板，我们一般一个孔（6孔板）传到6个48孔板中，密度大概10%或更低，长到30-40%，开始加G418筛选，等长出单克隆时，加胰酶消化传代，这个方法有个缺点，48孔板有的会长出多个克隆，这样消化下来的话是多克隆而不是单克隆，因此，如果转染效率高的话，接种密度低一点，长出来的单克隆会多点。

生物化学zy

回复 深海寂寞鱼 的帖子3 M- T7 P1 |& Y; ?# h

& b7 ?: t* K2 ]  C$ K9 l8 h( u是玻璃的那部分.自制的一个一个环,然后全部清洗,晾干.装在小烧杯中,包好,160度2h灭菌.
6 Y7 y* e5 p" h# e保存.  你挑克隆的时候可以在显微镜下用marker把克隆标出来,就是画个圆圈,标出位置,用镊子夹住克隆环,轻轻的放在那个圈上,不用密封.轻轻的加入胰酶,消化就行,就是整个过程中不要让克隆环移动就行.

xiangchou812

回复 生物化学zy 的帖子7 h/ h) f5 G* V* V

3 D6 k6 B8 _1 |9 u+ T玻璃的哪部分？不会是把瓶体砸下来，只留瓶口？用的时候倒过来？这能取到那么好的么？不知你们用的是什么口服液瓶子。$ q# d6 k4 o1 \- Q% P% W6 H

9 Z$ g  V7 I7 F/ i欢迎大家继续讨论

军医

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很好的方法

biovictor

如果实验室有足够的经费，可以选择做一些微流芯片，高效省时省力，可以很方便的筛选所需克隆。这里有一些介绍：( B6 I8 v& }) G( u7 e" b
　微流控芯片技术(Microfluidics)是把生物、化学、医学分析过程的样品制备、反应、分离、检测等基本操作单元集成到一块微米尺度的芯片上， 自动完成分析全过程。由于它在生物、化学、医学等领域的巨大潜力，已经发展成为一个生物、化学、医学、流体、电子、材料、机械等学科交叉的崭新研究领域。报告介绍微流控芯片技术领域国际最新发展，结合报告人多年微流控芯片研发成果，介绍一套完整而独特的芯片制造工艺技术，以及多种不同应用的微芯片。
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