请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

xiangchou812

细胞转染后用药物筛选一下，可以长出来克隆，不知大家怎么挑取的？3 y/ M8 ]* C3 \# {9 r4 _
我用过滤纸法，可能是不得法，细胞不往滤纸上粘，还在皿里。
" b* q$ w" _8 x7 F' i- _1 U7 r6 \7 z欢迎大家讨论，分享自己的经验。

wnavy200299

生物化学zy 发表于 2011-5-18 17:08 ! k0 t# W: K3 }, U4 l) G
顺便说一下,wnavy200299 是我师兄,哈哈

7 ~3 ^; e% b" I7 H0 |/ P
哈哈，共同为干细胞论坛添砖加瓦~~~

生物化学zy

顺便说一下,wnavy200299 是我师兄,哈哈

jiays

将细胞间紫外杀毒，将大皿放到显微镜上，确定克隆后，用一微升的枪吸取或挑取到96孔板中涮洗，一般都可以成功，这样不会被超净台拘泥，方便炒作

wnavy200299

不管用什么克隆环（玻璃瓶口环、大枪头粗短截断部分等），基本意思和思想是一致的。( b" g2 e/ b. V6 ~% f
转染一般用6cm板，转然后（12h后）分板，一般分板比例为1:10~12（1个6cm板分到10~12个6孔板），分板时不加药，次日换液开始加筛选培养液。一般10天左右出现克隆。挑克隆至24孔板培养。ok~

yiyeqiu

我们实验室的做法是用6孔板加药物筛选，当形成稳定的克隆后，用1ml的移液枪头比较大的那一段做成环，加胰酶消化，操作和楼上的差不多了。

sheepthief

回复 生物化学zy 的帖子
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( _% O! L+ c! d. i( S$ I$ Y  {% t高明

xiangchou812

回复 绿雪 的帖子3 }, f. u* L; g# j0 _

4 x2 {" K4 h2 M9 L0 L8 \% t$ |8 s准确点说应该是打靶的难筛，随机整合的细胞还是相对容易很多的。; `8 M! b/ v* f# ~% n
就用96孔板，一次转上两三皿细胞，做上两次应该就能筛得到的。

xiangchou812

回复 wnavy200299 的帖子
8 V8 \8 S* O) b+ c1 E' Q+ K3 n- o" Q4 n% m' U1 ^( Z5 [
非常感谢。这下一目了然。图片还是比文字明了啊。! A. d: d) i4 f9 B1 m$ X
不过这种方法好像只有在克隆少的时候管用吧？不过确实是个非常好的方法。/ C. p( p, l/ c0 j% T+ }0 y
学习了。

wnavy200299

更正“长了克隆就有可能养不起来。”
+ Y' z3 F# U+ @; T+ F挑了的克隆就有可能养不起来。”
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