关于间充质干细胞培养的一点经验

叶婷

胰酶用于消化、传代细胞。可放在CO2培养箱内3分钟加速消化，时间过长会影响细胞活性！消化完一定要用含血清的培养基终止消化！然后还要加适量DMEM/F12离心以洗掉胰酶！《将第一次消化下来的细胞离心，按一定比例传代（1:3，1:4，有时也用1:5）视细胞量的多少而定》能否举例给我讲解一下按比例离心传代的方法和具体步骤!非常感谢！

叶婷

回复 金戈 的帖子) b" y4 _1 B% Q; u, ^6 o

" h( t7 a$ C3 G请教您一个问题！谢谢赐教！做不同灭活温度下的血清培养细胞的结果实验：90°C ，80°C灭活15min 下的血清变成果冻状，加DMEM/F12绞碎后，离心，取其上清，据说血清内的生长因子在里面。用该上清养的细胞变形贴壁很密！70°C，60°C灭活后不凝固，直接离心，取上清，养出的细胞无贴壁。未灭活细胞有变形贴壁但不密！请问您大于56°C灭活的细胞还有活性吗？做出以上结果有可能吗？此实验方案对吗？

叶婷

回复 cx4236850 的帖子* Z4 @8 Z) U2 N

: G& {1 ?: g, t2 u4 A' R49楼第一种方法是我们常用的！就是要离心2次！洗2次细胞！不同的是我们用DMEM洗!第一次离心时为15oorpm5min,第二次离心时为1200rpm3min.作用是可以把胰酶洗干净！
+ i  `7 \6 {5 D但是在原代MSC传代消化时只离心1次1200rpm5min，即可传代，因为在培养基中保留一点组织块有利于细胞生长！经过试验得出！细胞会围绕着组织块变形贴壁生长！

叶婷

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把离心的rpm控制好应该没问题的！同时也需要把ACC（即开始离心时升高的速度）和EGC（即快离心完减慢的速度）控制好！一般各设为7和4！

叶婷

回复 zgzjhzxyj 的帖子5 o6 j$ @3 m0 @) F) B

/ k' e% m* M& A: g: k, {那你们解冻细胞时也不离心吗？那冻存液如何洗掉呢？冻存液中的DMSO可是有毒的哟！用含血清的培养基终止胰酶继续消化！但胰酶还存在细胞中呀！毕竟会对细胞造成影响呀！我觉得把rpm控制好问题不就解决了吗？

叶婷

回复 taxuewuge 的帖子3 j* z  `+ G/ g7 {+ c+ y; `

8 v) O, H2 o, L% ?加胰酶的培养基放37°CCO2培养箱中3min可以促进消化！去掉胰酶是不会丢失细胞！因为离心后细胞沉降！胰酶在上清液中！