关于分离精原干细胞，给点建议

ying

呵呵～我2月8号分的，今天正在准备转到MEF上。我没用磁珠分选，就是消化下来直接铺上的。
" C% |' T$ ~/ W3 M; X3 A$ `3 Q用的是DBA/2和 DBA/2×C57 两种，前者用7day后者用的是14day。感觉7天效果明显比14天好，克隆非常漂亮。我同时还用了C57的7天，完全相同条件养的，一个克隆都没长，可见品系极为重要。我用的是所谓“SF medium”，就是那个超级复杂的，基本没有改配方～ 没加LIF,孕酮，雌二醇。. f) A# A9 w6 [- n

( V* b0 e4 f: m2 f4，StemPro34 SFM base  Invitrogen, 10639-011   培养基
0 l5 s0 Z. o. E1 ^, @+ P1 V3 W10639-011) \# k* [9 U5 m" R
StemPro®-34 SFM (1X), liquid% ^+ ^8 P  P  `4 k: o8 \! G7 E/ P- g
500 ml: z- x) J; b+ r$ [, J! q& Z

) u. w# v$ \9 d1 `2 g: uhttp://zh.invitrogen.com/site/cn/zh/home/Products-and-Services/Applications/Stem-Cell-Research/Hematopoietic-Stem-Cells/HSC-Stem-Cell-Culture-Media-Reagents/stempro-34-sfm.html6 h  Y2 a7 a9 }6 w4 U. c4 k1 [

* k/ p4 x" {. i2 s9 T
  `7 a9 g" O5 E5 v) ~5，40X StemPro34 nutrient supplement  Invitrogen, 10639-011  培养基添加物6 o: Z5 K- N  S2 h! f
这个和上面的4是一起的。
$ `6 N) g& D6 u1 v3 V0 a0 y
6 v! Q8 ~7 h. S# k9 P
7 a* b" a5 a4 S! v! E6 T0 D+ Y; t& p6，Bovine serum albumin   Calbiochem, 126609   培养基添加物  final 5mg/ml
% K1 h; s" z/ c/ W. M5 Q& d, ^$ U
) @2 l4 a  K4 Y( H# Z, b( Uhttp://www.merck-chemicals.com/china/life-science-research/albumin-bovine-serum-fraction-v-fatty-acid-free-nuclease-and-protease-free/EMD_BIO-126609/chinese/p_oXeb.s1LbkMAAAEWTmIfVhTm?PortalCatalogID=merck4biosciences
4 H. Q- U3 u* u6 u- K8 G& d7 P1 I
8 Z2 ?3 N$ V1 [( W  l' f- ^$ }. M
7，d-(+) Glucose  Sigma, G7021   培养基添加物  final: 6mg/ml/ O8 w1 k5 _8 M! f% v0 p
/ i. N2 S, m4 f
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&N4=G7021%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC
& ~3 G2 s; S/ E+ H7 b$ E
: t$ k# ]5 ]; f8，L-Glutamine   Invitrogen, 25030-149   培养基添加物
$ R* Z0 V( I) i" j$ @
5 S( C2 P6 I9 h- xhttps://products.invitrogen.com/ivgn/product/25030149?ICID=search-product+ J5 _* S1 p2 c: S9 o( w& l; }

: [+ T) \% `" I9，100X MEM vitamins  Invitrogen, 11120-052   培养基添加物
4 W/ H5 U. A- p& U* B; r4 U) _5 e6 y  Z; C
http://products.invitrogen.com/ivgn/product/11120052?CID=AFLBC-Invitrogen-11120052) i7 K: {. \1 K* g7 ?
* L: g$ X9 z- v/ C  W( @
10，100X  Nonessential amino acids    Invitrogen, 11140-050   培养基添加物
' c) }( O, ?2 l6 ^8 Q7 [, w. h' s1 `3 [5 ?5 }  U8 c0 N
http://products.invitrogen.com/ivgn/product/11140050?ICID=search-11140050) F# _/ q9 f6 V* `8 e
11，d-Biotin   Sigma, B4639   培养基添加物  final: 10ug/ml* c' S8 P  C( c

; S) S" u3 r9 g7 G# |: g2 @http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&N4=B4639%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC5 Z( P7 X, {; c& a* ?. b! j9 X2 E' @

  f! F! u8 G2 u2 j" o6 p. v12，Insulin   Sigma, I1882   培养基添加物  final: 25ug/ml/ R( Z  Z. z* e

  w" t: G- b% Whttp://www.krackeler.com/products/sigma/SIGMA/I1882
; Q( ?9 v) s( I( G. ~# t6 p+ d2 A
  l4 z6 w5 m9 @$ z9 A5 U13，Pyruvic acid, sodium salt   Sigma, P4562   培养基添加物  final: 30ug/ml
' u! j" p! Q, C: k$ Z5 P9 T6 D2 y2 d, M; h+ f$ N/ U# w9 A
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=P4562|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC) x0 y0 j+ g( r* p, \
14，dL-Lactic acid (60% solution)  Sigma, L7900   培养基添加物  final: 0.06%
# \- B2 M3 h7 x$ ?
! V8 a" W% e  M; ~' e9 W* Z) L3 _15，Ascorbic acid   Sigma, A4034   培养基添加物) \1 N( `6 E4 u) T/ \
+ W, D( S4 r( N/ T+ G0 j6 Z
16，Sodium selenite   Sigma, S5261   培养基添加物 final:30nM
  ~7 f: H8 Q2 _  {& @
6 q/ i% D! w5 v% Q0 J7 w  h3 Y17，Putrescine  Sigma, P5780   培养基添加物  final: 60uM
. T" _; f/ z7 q6 @1 J/ |- p- N# L! b0 p& N4 B
18，Bovine Apo-transferrin   Sigma, T1428   培养基添加物  final: 100ug/ml
$ K: Z8 u/ B, o+ S6 L) y2 v19，Progesterone  Sigma, P8783   培养基添加物  60 ng/mL
* T# S: K! y" `7 x$ U孕酮。
9 l" q/ g0 e, P6 r20，β-Estradiol 17-cypionate  Sigma, E8004   培养基添加物  30 ng/mL8 s3 I$ y/ C2 l* _1 x0 e" p  {/ d
雌二醇。. ^+ }. F4 L& \8 Q" H, G4 R2 a
21，ESGRO (mouse LIF)    Chemicon, ESG1107   细胞因子  。
" Z& t6 |0 ?# i! d- B
# A0 }* o) D1 X) L) `22，Recombinant mouse EGF   R&D Systems, 2028-EG-200   细胞因子 final:20 ng/mL+ @/ I7 ^! z: f1 }6 Z6 r: k! `

7 t& t/ {* M7 t9 N5 k* hhttp://www.rndsystems.com/product_results.aspx?r=0&c=78&s=0&a=0&m=0&k=2028-EG-200&b=False&cj=-1&o=AND&p=0
4 ?! E2 X# [# H3 ~. I& x1 G5 Q6 x* l' N$ E, C. w9 J+ g' S
23，Recombinant human basic FGF  Sigma, F0291   细胞因子  final: 10 ng/mL
7 v) |( s; J' m( V3 r/ K  v2 Q5 }4 X1 D; L& m/ a- _! t0 F+ R, c
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=F0291|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC" O+ X- v* S% b: S& R! H

8 g- H; V# [% Y1 N' O! ^24，Recombinant rat GDNF  R&D Systems, 512-GF-050   细胞因子 final: 10ng/ml6 U+ L; ^* M1 t+ k' D$ K9 I, w
: s" T9 Y6 u/ D, @, X4 K5 @3 {
http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?c=78&s=0&o=AND&a=0&cj=-1&k=512-GF-050*
3 b) {1 I& ^4 F  _7 Y" X& z9 k& J
25， 2- mercaptoethanol  
( ?5 E( ]( a+ S: S, c& r7 _