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呵呵～我2月8号分的，今天正在准备转到MEF上。我没用磁珠分选，就是消化下来直接铺上的。0 B, N9 M- L! i: O" V# W9 {6 r1 z
用的是DBA/2和 DBA/2×C57 两种，前者用7day后者用的是14day。感觉7天效果明显比14天好，克隆非常漂亮。我同时还用了C57的7天，完全相同条件养的，一个克隆都没长，可见品系极为重要。我用的是所谓“SF medium”，就是那个超级复杂的，基本没有改配方～ 没加LIF,孕酮，雌二醇。
V# @2 n0 T; U# ]" ~5 E
0 J5 `1 O/ S1 j' j i4 n4，StemPro34 SFM base Invitrogen, 10639-011 培养基! w/ c0 e8 P4 C/ a8 B& u- G' Z
10639-011
2 Q6 n: A# x: s- [. zStemPro®-34 SFM (1X), liquid
( u/ k( b9 [7 `7 g8 F500 ml
! j$ ]/ T b6 q% |5 \1 n$ o4 Z x% j, K. w
http://zh.invitrogen.com/site/cn/zh/home/Products-and-Services/Applications/Stem-Cell-Research/Hematopoietic-Stem-Cells/HSC-Stem-Cell-Culture-Media-Reagents/stempro-34-sfm.html. b7 J. @5 D: Z
; W6 D* u7 V' A: c0 Z# C: p. X
3 u6 H9 |, S0 C% s& X5，40X StemPro34 nutrient supplement Invitrogen, 10639-011 培养基添加物
6 T/ l4 t- {' [/ s2 @' |这个和上面的4是一起的。+ ]$ u& O- A) c
0 C- ]6 ?: E! i: q( p" p. _ ~! R* W3 b
* s5 o" K3 T- J6，Bovine serum albumin Calbiochem, 126609 培养基添加物 final 5mg/ml3 o9 a7 q. X9 Z# K
2 _3 ]/ ^$ V4 X+ j7 F6 D0 l
http://www.merck-chemicals.com/china/life-science-research/albumin-bovine-serum-fraction-v-fatty-acid-free-nuclease-and-protease-free/EMD_BIO-126609/chinese/p_oXeb.s1LbkMAAAEWTmIfVhTm?PortalCatalogID=merck4biosciences
% n# c- T# S7 T7 X6 w/ |* S: ~, I4 j6 s' ?+ k% y, B! r' ]( {, Z+ d% q
$ O7 N, R: y: Y0 D" P
7，d-(+) Glucose Sigma, G7021 培养基添加物 final: 6mg/ml5 g: ^% S( O7 W9 [0 B
+ f5 l6 n$ B* w7 E8 p8 p; b( D$ jhttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&N4=G7021%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC3 v( ]8 T& D' X8 H' \
* G3 q$ Y; r* ]" Y
8，L-Glutamine Invitrogen, 25030-149 培养基添加物 : D0 y0 `1 r, n3 ]4 y
+ i* _) Y1 \1 f6 X, G! Z8 u
https://products.invitrogen.com/ivgn/product/25030149?ICID=search-product' H3 G* r w! V) S3 u/ K
. s2 E" T% S) @6 h7 k$ Y9，100X MEM vitamins Invitrogen, 11120-052 培养基添加物
* j+ x2 } G0 H" X) n R, z+ h0 `3 m- G! d" ~; \
http://products.invitrogen.com/ivgn/product/11120052?CID=AFLBC-Invitrogen-111200523 z5 k/ j( P' S Z- o! V
. R9 T- @) V% p8 L
10，100X Nonessential amino acids Invitrogen, 11140-050 培养基添加物( J' }. S" ` _7 `
6 }* a2 ~3 b7 }, j/ t3 v8 e0 r g q
http://products.invitrogen.com/ivgn/product/11140050?ICID=search-111400505 x3 P1 z2 ^" [) P$ P( |! i5 I. [5 v; O
11，d-Biotin Sigma, B4639 培养基添加物 final: 10ug/ml7 z: {+ D. w/ f# N
' E+ z. Y6 t) E) @+ K3 V& Mhttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&N4=B4639%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC4 P: m# T3 J. I2 y5 l# z7 h/ Q
7 m+ F- m. j: C) E: b12，Insulin Sigma, I1882 培养基添加物 final: 25ug/ml
4 b3 J( y* j! j) I. N8 _6 \2 B- [1 O& p* q7 r |" O1 ]" u0 ]) ~5 H1 Z
http://www.krackeler.com/products/sigma/SIGMA/I1882- K. i6 c! s7 w& i* t6 l4 a! ^
0 {! D0 M( j, D- x8 F13，Pyruvic acid, sodium salt Sigma, P4562 培养基添加物 final: 30ug/ml- g H: l% z, \+ o
5 _" n: t' n; V! W! I0 ]2 H& h
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=P4562|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC2 j9 ^* ?# d, I9 Z3 j
14，dL-Lactic acid (60% solution) Sigma, L7900 培养基添加物 final: 0.06%
7 s9 S* D4 j4 E8 K6 l8 t# Q9 g" k( ~0 O8 v' f v6 O
15，Ascorbic acid Sigma, A4034 培养基添加物( f, d0 A5 B8 s9 ?
" C4 B b( F- K" i16，Sodium selenite Sigma, S5261 培养基添加物 final:30nM" s! H# m* L6 V5 i$ @% t8 Q: p
; `! Q$ }- E& v; p5 n4 L3 S17，Putrescine Sigma, P5780 培养基添加物 final: 60uM/ m. v' \8 d2 E/ t7 l# F5 G
4 t1 U6 }& j0 h
18，Bovine Apo-transferrin Sigma, T1428 培养基添加物 final: 100ug/ml3 \2 ~( C" U" Y/ Z/ a2 @5 s. c
19，Progesterone Sigma, P8783 培养基添加物 60 ng/mL
: w7 C: c! m* {6 O孕酮。
* s( |& f* B" ?" r! N- V% W! _: \20，β-Estradiol 17-cypionate Sigma, E8004 培养基添加物 30 ng/mL
% t, x( G! c3 h雌二醇。
- j9 Z4 n1 K$ ~+ y6 m# y21，ESGRO (mouse LIF) Chemicon, ESG1107 细胞因子 。
" P. J' A# Y6 k: G
7 u! }" F. t q" \2 f22，Recombinant mouse EGF R&D Systems, 2028-EG-200 细胞因子 final:20 ng/mL' ]- y, T0 \+ P/ M' ^
; d! _$ G9 K& w! M9 j
http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?r=0&c=78&s=0&a=0&m=0&k=2028-EG-200&b=False&cj=-1&o=AND&p=0
0 T6 m5 d: ~- Q
/ h Q3 g$ ]4 W6 s% ]23，Recombinant human basic FGF Sigma, F0291 细胞因子 final: 10 ng/mL9 N" S) C/ F1 t5 c
9 B# U; i; P- c# \! _+ g8 ~http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=F0291|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC" s- _2 I$ i9 v: j N
" b( Y, r! U; p9 I5 v# \+ o; {
24，Recombinant rat GDNF R&D Systems, 512-GF-050 细胞因子 final: 10ng/ml
! H: J/ A C4 b
6 B" e. h0 Z* q" j* mhttp://www.rndsystems.com/product_results.aspx?c=78&s=0&o=AND&a=0&cj=-1&k=512-GF-050*. s# Z% I" Z( w6 N: P, `6 e
" j e1 P1 O* G0 l* ^$ Z, f9 w
25， 2- mercaptoethanol
! }) h" n" _( U, y: y |
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发表于 2011-7-24 19:49
发表于 2011-12-8 11:57
