关于分离精原干细胞，给点建议

ying

呵呵～我2月8号分的，今天正在准备转到MEF上。我没用磁珠分选，就是消化下来直接铺上的。# u5 p* h- l! D& }6 _
用的是DBA/2和 DBA/2×C57 两种，前者用7day后者用的是14day。感觉7天效果明显比14天好，克隆非常漂亮。我同时还用了C57的7天，完全相同条件养的，一个克隆都没长，可见品系极为重要。我用的是所谓“SF medium”，就是那个超级复杂的，基本没有改配方～ 没加LIF,孕酮，雌二醇。% _3 N2 f( l6 R  O, C0 N$ a, y
4 s% ]6 Y7 [$ E8 q# m  u" y
4，StemPro34 SFM base  Invitrogen, 10639-011   培养基
4 u' R0 e' d6 U( O7 u, `10639-0113 ^" }2 a: I. |9 _4 T! J* q
StemPro®-34 SFM (1X), liquid' \/ T" w1 u/ T5 y% _
500 ml' A' X8 _/ p9 d! p  ]. m

. t. Z( p6 S1 O( a& X# fhttp://zh.invitrogen.com/site/cn/zh/home/Products-and-Services/Applications/Stem-Cell-Research/Hematopoietic-Stem-Cells/HSC-Stem-Cell-Culture-Media-Reagents/stempro-34-sfm.html
3 T4 O$ V- ~) P8 R, _' k' \" a* ?0 A6 S3 G
) T; X' X- P" u+ g+ j  b" x
5，40X StemPro34 nutrient supplement  Invitrogen, 10639-011  培养基添加物# y7 a7 v1 X9 g1 `# s2 s  v
这个和上面的4是一起的。4 W3 C4 W: r5 T

* C; F. R; \$ d- K$ \
) m' e2 X. b0 v9 H; d' K0 D6，Bovine serum albumin   Calbiochem, 126609   培养基添加物  final 5mg/ml3 t( K  l" ~3 c; ?8 y: b

; J  d+ H( C  J0 C. I4 Khttp://www.merck-chemicals.com/china/life-science-research/albumin-bovine-serum-fraction-v-fatty-acid-free-nuclease-and-protease-free/EMD_BIO-126609/chinese/p_oXeb.s1LbkMAAAEWTmIfVhTm?PortalCatalogID=merck4biosciences
( d( k9 U! x; V& N& F
) E, x6 B* x1 w6 G
' }! X( k; ]% K* j4 v7，d-(+) Glucose  Sigma, G7021   培养基添加物  final: 6mg/ml
) O6 i- ]# g! q& P: G' o6 W6 g
- c  k* d4 v) Q% e: Ohttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&N4=G7021%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC
. Z8 C2 v7 B; `) d* W
+ v- H( d2 Y" W" R0 [8，L-Glutamine   Invitrogen, 25030-149   培养基添加物 ! z6 z. A7 J, o" m% y" z5 |4 O

/ |- E5 A5 h& v, _; m! l- w7 @& rhttps://products.invitrogen.com/ivgn/product/25030149?ICID=search-product  ~* X, d  w; o2 ?
3 Z. k. Y) A( _9 B
9，100X MEM vitamins  Invitrogen, 11120-052   培养基添加物% }& x) p5 y; A( S+ u. i) z8 }( M) M

" D3 j, ?; {- h$ chttp://products.invitrogen.com/ivgn/product/11120052?CID=AFLBC-Invitrogen-11120052
- f4 ~% i, M( k. s/ _9 n( m* G; l' j7 }. \9 ^9 |7 _) a
10，100X  Nonessential amino acids    Invitrogen, 11140-050   培养基添加物
5 X; J  B; U; ^' L0 G' y, p/ X) X& a9 h0 T1 x' h# o
http://products.invitrogen.com/ivgn/product/11140050?ICID=search-11140050
4 u4 N3 U( S# C& K  g! g11，d-Biotin   Sigma, B4639   培养基添加物  final: 10ug/ml
; T4 ~3 t) T9 A& d9 `1 {- N4 J# I: R$ a# h1 x2 L6 n
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&N4=B4639%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC0 P' a* l+ z; u4 b8 N

/ A1 X3 d+ `( q% s5 G, l3 N. P1 }12，Insulin   Sigma, I1882   培养基添加物  final: 25ug/ml0 P5 Z  [* e$ }; `
: x7 @; m% g1 \: F  L' R
http://www.krackeler.com/products/sigma/SIGMA/I1882
7 @+ C) E+ q2 u  n
$ H" d. Z6 ?  O" x4 ~% L9 Q/ v7 ?13，Pyruvic acid, sodium salt   Sigma, P4562   培养基添加物  final: 30ug/ml
# I& N, K* D; W: f$ Y" v
% o& B1 {5 g% O" x9 |' u# f' H7 Qhttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=P4562|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC( p0 ^  G8 |7 k, A& d, `
14，dL-Lactic acid (60% solution)  Sigma, L7900   培养基添加物  final: 0.06%
( [7 G, l6 B$ _$ N
) `0 }4 T0 S# G# i- J15，Ascorbic acid   Sigma, A4034   培养基添加物
( Q' a, j: [1 Z2 M: L* y" ?" \4 c( O2 W( H/ B8 m( I
16，Sodium selenite   Sigma, S5261   培养基添加物 final:30nM2 k- C3 z* H* b( i* h9 ^
0 q0 l7 W* c5 ]/ E6 [  @# H
17，Putrescine  Sigma, P5780   培养基添加物  final: 60uM
+ o+ K% Z7 U1 d& j- X5 T6 y; B) P3 d$ A7 S) ]& ]
18，Bovine Apo-transferrin   Sigma, T1428   培养基添加物  final: 100ug/ml
. W0 v# P4 U" W" \! m19，Progesterone  Sigma, P8783   培养基添加物  60 ng/mL1 x& E) ~& P7 V( P& E4 k3 n) G2 B& h
孕酮。
# w) d" b  w0 R+ Q' N/ h' T* `7 D20，β-Estradiol 17-cypionate  Sigma, E8004   培养基添加物  30 ng/mL
& ]0 K9 Y& S( t4 i  B雌二醇。
+ K( ?% u7 _& Q$ P' T2 Y21，ESGRO (mouse LIF)    Chemicon, ESG1107   细胞因子  。
+ o' b2 s/ t7 l" i/ C( ~! u& c) B5 V* M# V/ z  _# {
22，Recombinant mouse EGF   R&D Systems, 2028-EG-200   细胞因子 final:20 ng/mL- Y  r( F$ W- V* F2 Z
6 B5 ]7 }* [2 i' C5 `+ j0 g
http://www.rndsystems.com/product_results.aspx?r=0&c=78&s=0&a=0&m=0&k=2028-EG-200&b=False&cj=-1&o=AND&p=0) G& A3 t0 r: Y1 a1 {" [8 D
1 ?2 Q4 J/ a) V3 \
23，Recombinant human basic FGF  Sigma, F0291   细胞因子  final: 10 ng/mL
. w. \% N+ L' @: ^, h8 u8 [6 `7 z4 p! I
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=F0291|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPEC& c/ u7 \  ?( L7 n9 Q, F

/ o( B5 D! t3 b2 c9 K1 }: u3 z24，Recombinant rat GDNF  R&D Systems, 512-GF-050   细胞因子 final: 10ng/ml
3 S# C( Q5 O, T  C5 _
8 G8 I" m) N7 ^! lhttp://www.rndsystems.com/product_results.aspx?c=78&s=0&o=AND&a=0&cj=-1&k=512-GF-050*" [! K2 d3 x0 j7 Y0 `+ d" ]

& P" e) u6 ~% g- r25， 2- mercaptoethanol  
" K. \; O1 G! o' J2 x